[發明專利]基于抗原示蹤快速測定單克隆抗體效價免疫熒光試紙條

在審

• 申請號: 202010437394.2
• 申請日: 2020-05-21
• 公開（公告）號: CN111521827A
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發明（設計）人: 方水琴;劉箐;劉程晨;田亞晨
• 申請（專利權）人: 上海理工大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/558
• 代理公司: 上海德昭知識產權代理有限公司 31204
• 代理人: 郁旦蓉

本發明提供一種基于抗原示蹤快速測定單克隆抗體效價免疫熒光試紙條，具有依次排列的樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，其中，熒光標記的菌噴涂于所述結合墊上，羊抗鼠抗體噴涂于所述硝酸纖維素膜上形成檢測線，陽性血清或抗體噴涂于C線形成質控線。另外，本發明還提供了基于抗原示蹤快速測定單克隆抗體效價免疫熒光試紙條在快速檢測單克隆抗體效價中的應用。本發明的試紙條檢測時靈敏度高、時間短。

技術領域

本發明屬于生物檢測領域，具體涉及一種基于抗原示蹤快速測定單克隆抗體效價免疫熒光試紙條。

背景技術

單克隆抗體主要是由效應B細胞分泌的，將B細胞與骨髓瘤細胞進行融合，既保持了效應B細胞分泌特異性抗體的能力，同時也具有骨髓瘤細胞的無限增殖的能力。目前單克隆抗體按制備方式有雜交瘤單克隆抗體，重組單克隆抗體和噬菌體展示單克隆抗體等，這些建株制備單克隆抗體的方法各有優缺點，但有一個共同點是制備工藝繁瑣，制備周期長，需要多次陽性測試篩選以及建株后的陽性測定。同時，對于獲得的單克隆抗體，需要對其進行一個效價的測定，以便有一個更好的稀釋指導范圍，從而保證了抗體的使用。

目前，對單克隆抗體的篩選、效價的測定均依賴間接ELISA方法，該方法主要是將抗原固定在固相載體上，封閉，洗脫，與目標的抗體孵育，洗脫，與酶標二抗孵育，洗脫，形成抗原-抗體-酶標二抗的三元復合物，催化底物形成有色物質，產物的量與抗體的量直接相關，每次測定時間需要5h-24h。這種費時費力的測定方式，已經成為制約單克隆抗體制備及使用的重要瓶頸之一。

因此，在檢測抗體的陽性及效價時，有必要設計一種利用抗原示蹤的高靈敏度的試紙條。

發明內容

本發明是為了解決上述問題而進行的，目的在于提供一種基于抗原示蹤快速測定單克隆抗體效價免疫熒光試紙條。

本發明提供了一種基于抗原示蹤快速測定單克隆抗體效價免疫熒光試紙條，具有依次排列的樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，具有這樣的特征：其中，熒光標記的菌噴涂于結合墊上，羊抗鼠抗體噴涂于硝酸纖維素膜上形成檢測線，陽性血清或抗體噴涂于C線形成質控線。

本發明還提供了基于抗原示蹤快速測定單克隆抗體效價免疫熒光試紙條在快速檢測單克隆抗體效價中的應用。

發明的作用與效果

根據所涉及的本發明的基于抗原示蹤快速測定單克隆抗體效價免疫熒光試紙條，能夠進行便捷、快速的檢測抗體的陽性及效價，可大大提高單克隆抗體篩選和制備的效率，能夠使高質量的抗體得到快速的應用。

附圖說明

圖1是本發明實施例中基于抗原示蹤快速測定單克隆抗體效價結構圖；

圖2是本發明實施例中抗原不同標記方法測試結果圖；

圖3是本發明實施例中不同濃度FITC標記革蘭氏陰性菌大腸桿菌O157:H7流式細胞儀測試結果圖；

圖4是本發明實施例中不同濃度FITC標記革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌流式細胞儀測試結果圖；

圖5是本發明實施例中標記后的革蘭氏陰性菌大腸桿菌O157:H7在熒光顯微鏡下觀察的結果圖；

圖6是本發明實施例中結合墊噴涂不同濃度熒光標記的菌的測試結果圖；

圖7是本發明實施例中基于抗原示蹤熒光試紙條測試血性大腸桿菌O157:H7細胞上清中抗體效價結果圖；

圖8是本發明實施例中基于抗原示蹤熒光試紙條測試出血性大腸桿菌O157:H7腹水中抗體效價結果圖；

圖9是本發明實施例中基于抗原示蹤熒光試紙條測試出血性大腸桿菌O157:H7純化后的抗體效價結果圖。

具體實施方式