[發明專利]一種人類免疫缺陷病毒HIV-1的檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202010436839.5
• 申請日: 2020-05-21
• 公開（公告）號: CN111719015A
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發明（設計）人: 王昆華;魯丹楓;況軼群;謝振榮;李少遊;王悅欣;耿世濤
• 申請（專利權）人: 昆明醫科大學第一附屬醫院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 昆明合盛知識產權代理事務所(普通合伙) 53210
• 代理人: 龍燕

1.一種人類免疫缺陷病毒HIV-1的檢測試劑盒，其特征在于：包括DNA的等溫擴增-CRISPR技術檢測引物和探針；

所述HIV體外等溫核酸擴增-CRISPR的特異性引物，包括上游引物HIV-RAA_F和下游引物HIV-RAA_R；

上游引物HIV-RAA_F：TACTTCAAGAACTGCTGACATCGAGCTTGC TAC；

下游引物HIV-RAA_R：CGCCACTGCTAGAGATTTTCCACACTGACT；

所述探針核苷酸序列為：TTTCCACACTGACTAAAAGGGTCT。

2.根據權利要求1所述人類免疫缺陷病毒HIV-1的檢測試劑盒，其特征在于：

所述引物配合使用的ssDNA-FQ報告基因探針的核苷酸序列為：FAM-T TATT-BHQ1。

3.根據權利要求1或2所述人類免疫缺陷病毒HIV-1的檢測試劑盒，其特征在于：還包括陰性對照模板、陽性對照模板、RAA等溫核酸擴增試劑、10x NEB Buffer2.1、40U/μL的RNase抑制劑、2mol/L的DTT及2μm ol/L的EnGen Lba Cpf1核酸酶；

所述的陰性對照模板為Ribozyme-free水和pUC57-HBV質粒；

所述的陽性對照模板為pUC57-HIV LTR質粒。

4.根據權利要求3所述人類免疫缺陷病毒HIV-1的檢測試劑盒，其特征在于：所述的RAA等溫核酸擴增試劑包括基礎反應液、裝有凍干粉的基礎反應單元及乙酸鎂溶液。

5.根據權利要求4所述人類免疫缺陷病毒HIV-1的檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒的RAA等溫核酸擴增體系為：

基礎緩沖液，25.0μL；

上游引物HIV-RAA_F 10μmol/L，2.0μL；

下游引物HIV-RAA_R 10μmol/L，2.0μL；

模板DNA，1.0μL；

純化水，17.5μL；

乙酸鎂溶液，2.5μL；

總計50.0μL。

6.根據權利要求3所述人類免疫缺陷病毒HIV-1的檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒的核酸擴增程序：37℃反應40分鐘；反應結束后，每個反應管中加入50μL酚/氯仿(1:1)，用渦旋震蕩儀充分振蕩均勻，12000rpm離心1分鐘。

7.根據權利要求3所述人類免疫缺陷病毒HIV-1的檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒的CRISPR DNA檢測體系為：

10x NEB Buffer2.1，2.0μL；

EnGen Lba Cpf1核酸酶，2.0μL；

LTR-crRNA探針10μmol/L，1.0μL；

RAA擴增產物，4.0μL；

ssDNA-FQ報告基因探針100μmol/L，0.2μL；

RNase抑制劑，0.25μL；

DTT，0.1μL；

Ribozyme-free水，10.45μL；

總計20.0μL。

8.根據權利要求1所述人類免疫缺陷病毒HIV-1的檢測試劑盒，其特征在于：37℃反應40分鐘，98℃加熱5分鐘終止反應。