[發明專利]一種利用miR156創制高花色素園藝觀賞楊樹的方法

有效

• 申請號: 202010436439.4
• 申請日: 2020-05-21
• 公開（公告）號: CN113774080B
• 公開（公告）日: 2022-12-09
• 發明（設計）人: 付春祥;王亞梅;劉文文;吳振映;楊瑞娟;王寒;李玉;姜珊珊;林金星;王鑫偉
• 申請（專利權）人: 中國科學院青島生物能源與過程研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/113;A01H5/00;A01H5/04;A01H5/12;A01H6/00
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 趙徐平

本發明公開了一種利用miR156創制高花色素園藝觀賞楊樹的方法，屬于植物基因工程技術領域。利用前體miR156b構建超表達載體，通過農桿菌介導法，將超表達載體轉化楊樹葉片，在楊樹中過量表達miR156。所獲得的轉基因植株miR156表達量顯著提高，花色素含量顯著增加，植株矮化，葉片和分枝增多，進而提高了楊樹的園藝觀賞價值。

技術領域

本發明涉及植物基因工程技術領域，更具體的說是涉及一種利用miR156創制高花色素園藝觀賞楊樹的方法。

背景技術

園藝景觀樹木的觀賞性主要體現在樹形和色彩方面。楊樹高大挺拔、葉大蔭濃、生長較快、適應性強，是優良的綠化樹種，具有一定的觀賞價值。然而，受部分綠化空間高度的限制，以楊樹作為景觀植物需要進行修剪以使個體植株的高度符合整體景觀和生態的要求；另外，楊樹的色彩也較為單一；因此，需要從樹形與色彩入手尋求提高楊樹的園藝觀賞價值的方法。

microRNA(miRNA)是一類廣泛存在于動植物中的內源性非編碼小RNA，長度大約為21-24nt。通過一系列的合成和作用機制，其可以在轉錄后降解mRNA或者通過抑制蛋白翻譯來行使生物學功能，對植物和動物的基因表達具有負調控作用。MicroRNA參與植物生長發育、非生物/生物反應、代謝物生物合成等重要的生物過程。

因此，如何利用microRNA進行楊樹生長與代謝調控，提高楊樹的園藝觀賞價值是本領域技術人員亟待解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種利用miR156創制高花色素園藝觀賞楊樹的方法。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

苜蓿miR156在調控楊樹花色素合成中的應用，miR156的成熟序列如SEQ ID NO.1所示。

優選地，通過在楊樹中超表達苜蓿miR156提高楊樹中花色素含量。

苜蓿miR156的前體miR156b在調控楊樹花色素合成中的應用，前體miR156b核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

苜蓿miR156的成熟序列為前體miR156b序列自5’段6bp-25bp的一段RNA序列。

優選地，利用前體miR156b構建超表達載體，將超表達載體轉入楊樹中，通過在楊樹中超表達苜蓿miR156提高楊樹中花色素含量。

一種利用miR156創制高花色素園藝觀賞楊樹的方法，在楊樹中超表達苜蓿miR156。

優選地，上述方法包括如下步驟：

(1)利用前體miR156b構建超表達載體；

(2)通過農桿菌介導法，將超表達載體轉化楊樹葉片，在楊樹中過量表達miR156。

進一步地，超表達載體的具體構建方法如下：

1)以苜蓿R108的DNA做模板，用HiFi高保真擴增酶和引物pre-MtmiR156b-F、pre-MtmiR156b-R克隆苜蓿miR156的前體miR156b。

pre-MtmiR156b-F：CACCCTCCTCAGACAACAACAAG，SEQ ID NO.4；

pre-MtmiR156b-R：CTGGTGGTAGGATTTTTGTCA，SEQ ID NO.5。

2)通過XcmI酶切pCXSN質粒。

3)用T4連接酶將步驟1)中的擴增片段和步驟2)酶切的pCXSN連接，得到含有前體miR156b的超表達載體pCXSN-pre-MtmiR156b。