[發明專利]一種腸易激綜合征小鼠模型及其應用

有效

• 申請號: 202010430662.8
• 申請日: 2020-05-20
• 公開（公告）號: CN113699187B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 劉翠華;汪靜
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N15/90
• 分類號: C12N15/90;C12N15/85;C12N15/877;C12N15/113;A01K67/027;C12N15/54;A61K49/00
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

本發明公開了一種腸易激綜合征小鼠模型及其應用，屬于生物醫藥技術領域。本發明首次發現了敲除Trim27基因后，小鼠可以自發腸易激綜合征。本發明通過對小鼠模型腸通透性、腸細胞因子表達、腸5羥色胺濃度、腸道菌群、結腸長度等指標進行分析，發現以上指標的變化趨勢與臨床報道的腸易激綜合征患者的上述指標趨勢一致，表明該小鼠模型是一種有效的自發腸易激綜合征模型，可以用于腸易激綜合征相關藥物篩選研發、基礎科研等領域，同時在腸易激綜合征的診斷、預防、治療方面將有著廣闊的應用前景。

技術領域

本發明涉及一種腸易激綜合征小鼠模型及其應用，屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

腸易激綜合征(irritable?bowel?syndrome，IBS)是一種功能性胃腸疾病，其患病率在發達和發展中國家都非常高。歐美報道IBS患者數量為總人口數的10％-20％，我國IBS患者比例也高達5.2％-12.6％，且患者以中青年居多。IBS臨床主要表現為腹痛，并伴有排便習慣的改變，但無明顯的器質性異常。IBS的病因和發病機制比較復雜，其主要病理癥狀包括腸運動功能障礙，內臟過敏，低度炎癥，腸粘膜屏障異常，腸道菌群失衡，內臟-腦軸功能障礙等。IBS患者人數在全球范圍內居高不下，他們不但生活質量和工作效率低下，更給國家醫療系統造成較大負擔，但目前尚沒有可用的動物模型用于相關科學研究。

發明內容

本發明旨在提供Trim27基因在制備腸易激綜合征動物模型中的應用，將其用于構建能自發腸易激綜合征的小鼠模型，可用于腸易激綜合征相關藥物篩選等的研究。

本發明的第一個目的是提供一種腸易激綜合征動物模型的構建方法，是通過動物Trim27基因特異性敲除，或抑制TRIM27蛋白表達的方式構建自發性腸易激綜合征的動物模型。

在一種實施方式中，所述方法包括：應用CRISPR/Cas9技術構建Trim27基因敲除的動物，將所述Trim27特異性基因敲除的動物與同類動物進行交配，從而獲得Trim27基因敲除的自發性腸易激綜合征的動物模型。

在一種實施方式中，所述方法利用CRISPR/Cas技術、Cre-LoxP技術、TALEN技術、ZFN技術等進行動物Trim27基因特異性敲除。

在一種實施方式中，所述抑制TRIM27蛋白表達通過特異性蛋白抑制劑實現。

在一種實施方式中，所述動物模型是嚙齒類動物模型；所述嚙齒類動物包括但不限于小鼠。

在一種實施方式中，所述方法用于構建一種具有自發性腸易激綜合征的小鼠。

在一種實施方式中，所述小鼠不表達SEQ?ID?NO：1所示的全部Trim27核苷酸序列。

在一種實施方式中，所述小鼠的TRIM27蛋白沉默或受抑制；所述TRIM27蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

在一種實施方式中，所述TRIM27蛋白的一個或多個氨基酸經過沉默突變。

在一種實施方式中，所述方法包括如下步驟：

(1)提供一種細胞，所述細胞包含一種或多種sgRNA載體或sgRNA載體的體外轉錄產物；

(2)將步驟(1)所述細胞在培養液中進行培養；

(3)將步驟(2)培養后的細胞移植至受體雌性小鼠的輸卵管內，使所述細胞在所述雌性小鼠的子宮中發育；

(4)鑒定步驟(3)所述懷孕雌性的后代基因改造小鼠的種系傳遞。

在一種實施方式中，所述方法的具體步驟包括：

(1)提供靶向Trim27基因的sgRNA序列，制備獲得正向寡核苷酸序列和反向寡核苷酸序列；