[發明專利]表達功能化淀粉樣纖維的希瓦氏菌及其構建方法與應用

有效

• 申請號: 202010430308.5
• 申請日: 2020-05-20
• 公開（公告）號: CN111690583B
• 公開（公告）日: 2023-10-10
• 發明（設計）人: 雍陽春;索迪;方真
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;C12N11/14;C02F3/34;C12R1/01;C02F101/20
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1.一種表達功能化淀粉樣纖維的希瓦氏菌，其特征在于，以希瓦氏菌MR-1為宿主，其基因組DNA中含有在淀粉樣蛋白CsgA序列C端連接肽結構域LACQCL的基因片段csgA-LACQCL；所述基因片段csgA-LACQCL的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種表達功能化淀粉樣纖維的希瓦氏菌的構建方法，其特征在于，包括步驟：

（1）將肽結構域LACQCL翻譯成核苷酸序列，通過柔性序列GSGGSG與大腸桿菌的淀粉樣纖維curli的亞基csgA基因的C端連接，最終構建表達功能化淀粉樣纖維curli的基因片段csgA-LACQCL；

（2）將步驟（1）中的基因片段csgA-LACQCL與表達載體pBBR-ParcA雙酶切連接構建重組質粒pBBR-ParcA-csgA-LACQCL；

（3）將步驟（2）構建的重組質粒pBBR-ParcA-csgA-LACQCL轉化至宿主大腸桿菌WM3064中，再結合轉移至希瓦氏菌中，構成重組希瓦氏菌。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述基因片段csgA-LACQCL的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，編碼步驟（1）中所述csgA-LACQCL的核苷酸序列，如SEQ ID NO.2所示。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述的基因片段csgA-LACQCL為以大腸桿菌基因組為模板，設計引物PCR擴增，擴增所述基因片段的上游引物如SEQ ID NO.3所示，下游引物序列如SEQ ID NO.4~5所示。

6.一種重金屬離子生物吸附膜，其特征在于，包括有權利要求1構建的表達功能化淀粉樣纖維的希瓦氏菌和一定分量的活性炭。

7.一種重金屬離子生物吸附膜的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將表達功能化淀粉樣纖維的希瓦氏菌接種于YESCA培養基，30℃、200rpm搖床培養至OD600=2收集菌液；

（2）將活性炭加入步驟（1）得到的菌液中浸泡，微孔濾膜抽濾，得到重金屬離子生物吸附膜。

8.根據權利要求7所述的重金屬離子生物吸附膜的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述接種的接種率為1%；步驟（2）中所述微孔濾膜為水系濾膜，直徑40~60mm，孔徑0.45mm。

9.根據權利要求7所述的重金屬離子生物吸附膜的制備方法，其特征在于，步驟（2）中所述活性炭的粒徑為10~20μM，菌液與活性炭的比例關系為每1L菌液中加入活性炭700~800mg。

10.根據權利要求1所述表達功能化淀粉樣纖維的希瓦氏菌在水環境中重金屬離子吸附領域中的應用。