[發明專利]利用朱砂煙內生菌復合發酵制備煙草香料的方法

在審

• 申請號: 202010429431.5
• 申請日: 2020-05-20
• 公開（公告）號: CN111575205A
• 公開（公告）日: 2020-08-25
• 發明（設計）人: 劉煜宇;羅建飛;陳俊宇;劉麗芬;包秀萍;李艷;楊上鶯;李紅霞;包崇彥;徐蘭蘭;念小魁;劉維涓
• 申請（專利權）人: 云南瑞升煙草技術（集團）有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12P1/04;A24B3/12;C12R1/07;C12R1/125
• 代理公司: 昆明大百科專利事務所 53106
• 代理人: 李云

利用朱砂煙內生菌復合發酵制備煙草香料的方法，將朱砂煙新鮮煙葉進行表面消毒法操作后，在NA培養基上按照稀涂平板法反復進行分離純化培養，直至獲得單一菌株進行常規保種；取所得純系內生菌菌株，在LB培養基中進行培養，并對菌株的生長速度及發酵液的香氣進行評價，最終篩選得到2株優勢產香內生菌，經鑒定A菌為短小芽孢桿菌，B菌為枯草芽孢桿菌；將A菌和B菌同時接種到煙草提取液中，接入的種子液的質量是處理產物質量的0.1～20％，20～60℃培養2～120h；將發酵產物濃縮處理，即得仿朱砂煙煙草香料。本發明可以提高煙草香料的抽吸品質和檔次，且工藝簡單、制備成本低、易于實現產業化。

技術領域

本發明涉及煙用香料制備技術領域，具體涉及利用朱砂煙內生菌復合發酵制備煙草香料的方法。

背景技術

朱砂煙為云南優質煙葉的名稱，特指帶朱砂花紋的煙葉，朱砂花紋遍布葉片正反面。云煙煙絲的特點是煙絲橙黃鮮明，光澤油潤，香味清雅，無雜氣，無刺激，余味純正。而云煙煙絲的極品就是朱砂煙絲，因為數量稀少，所以價格很高。朱砂煙煙勁中等，味厚實飽滿，醇香無辛辣感，喉部回甘特別明顯。致香成分分析表明，朱砂煙的葉黃素和β-胡蘿卜素、巨豆三烯酮和棕櫚酸含量顯著高于普通煙葉。

植物內生菌是一個多樣性十分豐富的微生物類群，分布在沒有外部感染的植物組織內，并與宿主植物協同進化，可能與寄生植株生理生化特性存在著密切的相關性，能產生豐富多樣的具有生物活性的代謝產物。植物內生菌資源的篩選及利用對于生物技術在煙用香精香料的開發中具有極為重要的意義。

目前有關發酵煙用香料的制備技術有一些公開文獻，大多局限于果蔬類原料的發酵產品開發，并且大部分是利用單一菌株，如中國專利CN105733962B公開了一種黃綠木霉HLMM-04菌株及制備煙用香料的方法，中國專利CN109722393A公開了一種煙草黃色土源菌及其分離方法和應用，中國專利CN109136146A公開了一種煙草土壤戴氏菌及其分離方法和應用，中國專利CN108587960A公開了一種產香放線菌菌株及其應用，中國專利CN108330077A公開了一種黃暗色鏈霉菌及其應用，中國專利CN108220188A公開了一種溶桿菌及其應用，中國專利CN104195181A公開了一種黃瓜發酵提取物及其制備方法和應用，中國專利CN107236767A公開了一種用米曲霉發酵胡蘿卜制備煙用香料的方法。這些方法均存在發酵產香的菌株不是來源于煙草原料本身，而且發酵產物香氣特征與卷煙產品香氣風格不諧調的不足。

有關復合發酵制備煙草香料的技術也有少量公開文獻，如中國專利CN103911419A公開了一種雙菌株聯合發酵生產L-纈氨酸的方法，中國專利CN102894467A公開了利用固定化酶制劑結合醋酸菌發酵制備煙草提取物的方法。這些方法要經過連續2次發酵和處理，工藝復雜且成本較高，較難實現產業化。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的不足，開發一種可以提高煙草香料的抽吸品質和檔次，且工藝簡單、制備成本低、易于實現產業化的利用朱砂煙內生菌復合發酵制備煙草香料的方法。

本發明采取的技術方案如下：

利用朱砂煙內生菌復合發酵制備煙草香料的方法，方法步驟如下：

(1)內生菌的分離純化：朱砂煙新鮮煙葉進行表面消毒法操作后，在NA培養基上按照稀涂平板法反復進行分離純化培養，直至獲得單一菌株進行常規保種；取所得純系內生菌菌株，在LB培養基中進行培養，并對菌株的生長速度及發酵液的香氣進行評價，最終篩選得到2株優勢產香內生菌，經鑒定A菌為短小芽孢桿菌(Bacilluspumilus)，B菌為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)；

(2)煙用香料的復合發酵：將篩選所得純系產香內生菌A菌和B菌，同時接種到煙草提取液中，接入的種子液的質量是處理產物質量的0.1～20％，20～60℃培養2～120h；

(3)產品濃縮制備：將發酵產物濃縮處理，即得仿朱砂煙煙草香料。