[發明專利]一種基于pH/MMP響應的“可解離”納米膠束的制備方法及應用

在審

• 申請號: 202010428930.2
• 申請日: 2020-05-20
• 公開（公告）號: CN111529486A
• 公開（公告）日: 2020-08-14
• 發明（設計）人: 王蕾;丁楷莉;鄭翠霞;孫玲玲;王蓉;劉欣欣;孫月紅;王一凡;周逢源;張振中
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: A61K9/107
• 分類號: A61K9/107;A61K31/195;A61K31/337;A61K31/4188;A61K31/635;A61K31/704;A61K47/42;A61K47/61;A61K47/62;A61K47/59;A61P35/00;A61P37/02
• 代理公司: 鄭州天陽專利事務所(普通合伙) 41113
• 代理人: 聶孟民

1.一種基于pH/MMP響應的“可解離”納米膠束的制備方法，其特征在于，首先，合成靶向性前藥的透明質酸@R，再將其馬來酰亞胺化；其次，將馬來酰亞胺化后的前藥通過基質金屬蛋白酶敏感肽與pH敏感嵌段聚（β-氨基酯）連接，形成具有pH/MMP雙敏感的嵌段，通過自組裝包裹免疫調節劑，得基于pH/MMP響應的“可解離”納米膠束，具體步驟如下：

（1）透明質酸前藥的合成：取480-500mg的透明質酸溶解于15-25mL的甲酰胺溶液中，加入70-80mg 4-二甲氨基吡啶和115-125mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，40℃攪拌1h，對透明質酸的羧基進行活化；隨后，將50mg抗腫瘤藥物R溶于1mL的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，繼續攪拌24h，反應完成后，將反應液置于MWCO:5000Da的透析袋中，在體積濃度75%乙醇溶液中透析12h，再置于體積濃度50%乙醇溶液中透析12h，然后置于去離子水中透析48h，除去未反應的物質，將所得溶液凍干，即得透明質酸前藥，4℃下保存備用；

所述抗腫瘤藥物R為蒽環類藥物的紫杉醇或阿霉素；

（2）透明質酸前藥的馬來酰亞胺化：取630-650mg的6-馬來酰氨基甲酸、680-700mg N-羥基丁二酰亞胺和1.18-1.2g 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽溶解于20-25mL N,N-二甲基甲酰胺溶液中，室溫攪拌1h，隨后加入480-500mg透明質酸前藥，室溫反應24h，再將反應溶液置于MWCO:5000Da的透析袋中，在去離子水中透析3天，凍干得到馬來酰亞胺化的透明質酸前藥；

（3）R@HA-多肽（R@HA-peptide）的合成：取80-100mg多肽（SH-peptide-COOH）、480-500mg馬來酰亞胺化的透明質酸前藥，在室溫下攪拌24h，將反應液置于MWCO:5000Da透析袋中，在去離子水中透析2天，凍干，備用；

所述多肽為MMP-2敏感肽（SH-CPLGLAGG-COOH，SH-GPLGVRGG-COOH）或MMP-9敏感肽（SH-CGPLGLPGKGG-COOH）；

（4）pH/MMP敏感嵌段的合成：取480-500mg R@HA-peptide、70-80mg N-羥基丁二酰亞胺，115-125mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽反應1h，加入580-600mg PAE-NH₂，反應24h，將反應液置于MWCO:5000Da透析袋中在去離子水中透析3天，凍干得R@HA-peptide-PAE，即pH/MMP敏感嵌段；

（5）制備pH/MMP響應的“可解離”納米膠束：稱取20mg R@HA-peptide-PAE、免疫調節劑4mg，溶于1ml的二甲基亞砜中，逐滴加入去離子水直至渾濁出現，室溫攪拌6h，將反應液置于MWCO:5000Da透析袋中，在去離子水中透析12h，然后將所得溶液用0.45μm的濾膜過濾，獲得pH/MMP響應的“可解離”納米膠束；

所述免疫調節劑為對腫瘤微環境調節的藥物塞來昔布、NLG919或GW3965。