[發(fā)明專利]一種Redondovirus病毒核酸檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010427975.8
• 申請日: 2020-05-20
• 公開（公告）號(hào): CN111560475A
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李宏偉;王俊玲;李秀萍;方哲偉;楊春菊;劉紅霞;熊倩;楊錦四;胡建鵬;高連灝
• 申請（專利權(quán)）人: 曲靖市第一人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發(fā)明公開了一種Redondovirus病毒核酸檢測試劑盒，包括以下組分Redondovirus病毒PCR擴(kuò)增反應(yīng)液、陽性對照和陰性對照；本發(fā)明首先建立了診斷Redondovirus病毒感染核酸檢測的途徑，該試劑盒具有非常高的特異性和敏感性，技術(shù)操作不復(fù)雜，可以有利于早期診斷、無癥狀病人診斷、以及病程的跟蹤；試劑盒檢測是全封閉操作，加入樣本后可以不再打開管蓋，減少了污染的概率；試劑盒可重復(fù)性強(qiáng)、檢測結(jié)果快速客觀；在臨床診斷、疾病預(yù)防檢測領(lǐng)域具有極大的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及核酸檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體一種Redondovirus病毒核酸檢測試劑盒。

背景技術(shù)

Redondovirus于2019年被發(fā)現(xiàn)存在于人體內(nèi),在人的呼吸系統(tǒng)定居，并與人類多種疾病相關(guān)。Redondovirus編碼兩個(gè)來自環(huán)形、Rep編碼的單鏈DNA病毒，與衣殼蛋白和Rep蛋白相似的蛋白，以及一個(gè)高度保守的開放閱讀框架，與任何已知的蛋白家族沒有同源性。Redondoviruses是呼吸道樣本中第二大流行病毒，僅次于風(fēng)疹病毒。

開展Redondovirus病毒的監(jiān)測對流行病學(xué)研究及肺移植的發(fā)展都有極其重要的意義。目前醫(yī)院沒有建立診斷Redondovirus病毒感染的方法，但從病毒學(xué)的角度來說，檢測病毒的方法主要有病毒分離培養(yǎng)、免疫學(xué)診斷以及核酸檢測法。病毒分離培養(yǎng)檢測操作復(fù)雜，費(fèi)時(shí)較長，需幾周才能報(bào)告結(jié)果，且敏感性低；免疫學(xué)診斷主要以金標(biāo)法和EIA為主，具有快速，簡便等優(yōu)點(diǎn)，但特異性和敏感性較差；核酸檢測法是剛剛興起的最新的檢測方法，發(fā)展迅速，具有非常高的特異性和敏感性，技術(shù)操作也不復(fù)雜，可以有利于早期診斷、無癥狀病人診斷、以及病程的跟蹤。

目前國內(nèi)的核酸診斷中應(yīng)用最為廣泛的是以熒光標(biāo)記探針為基礎(chǔ)的實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)。檢測探針為包括5′端報(bào)告基團(tuán)和3′端淬滅基團(tuán)的寡核苷酸。當(dāng)探針完整時(shí)，由于淬滅基團(tuán)靠近報(bào)告基團(tuán)而極大降低了報(bào)告基團(tuán)發(fā)出的熒光。引物延伸時(shí)，與模板結(jié)合的探針被Taq酶(5′→3′外切核酸酶活性)切斷，報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，產(chǎn)生熒光信號(hào)。在每次PCR循環(huán)中，都有新的報(bào)告基團(tuán)被剪切，因此熒光信號(hào)強(qiáng)度的增加與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量成正比。對于熒光PCR檢測病毒來說，引物的設(shè)計(jì)至關(guān)重要，其直接影響檢測的特異性。如果引物的特異性不夠，則可能導(dǎo)致假陽性的出現(xiàn)。

雙重?zé)晒舛縋CR技術(shù)則是在同一反應(yīng)體系中加入兩條不同熒光標(biāo)記的探針。例如，針對靶基因1的探針標(biāo)記FAM，針對靶基因2的探針標(biāo)記VIC。PCR反應(yīng)過程中，若待檢樣本包含靶基因1，則標(biāo)記FAM的探針產(chǎn)生熒光信號(hào)；若待檢樣本包含靶基因2，則標(biāo)記VIC的探針產(chǎn)生熒光信號(hào)。這樣，同一管反應(yīng)則可確定兩個(gè)靶基因。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種對食蟹猴干細(xì)胞熒光示蹤的方法。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：設(shè)計(jì)一種Redondovirus病毒核酸檢測試劑盒，包括以下組分Redondovirus病毒PCR擴(kuò)增反應(yīng)液、陽性對照和陰性對照。

優(yōu)選的，所述Redondovirus病毒PCR擴(kuò)增反應(yīng)液包含以下組分：

組分(1)：一對用于檢測Redondovirus病毒的引物；其中，兩條引物的序列分別為SEQ ID No.1、SEQ ID No.2，SEQ ID No.1、SEQ ID No.2引物核苷酸序列如表1所示：

表1 Redondovirus病毒的引物及其探針序列

組分(2)：一條用于檢測Redondovirus病毒的探針，所述探針的序列為SEQ IDNo.3所示，SEQ ID No.3核苷酸序列如表1所示，該探針的5′端標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán)，3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)。