[發(fā)明專利]一種呼吸道感染用快速鑒定試劑盒及其鑒定方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010426434.3 | 申請日： | 2020-05-19 |
| 公開（公告）號： | CN111579780A | 公開（公告）日： | 2020-08-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 邱洪斌;劉蕾;侯霞;吳慶田;李升 | 申請（專利權(quán)）人： | 佳木斯大學(xué) |
| 主分類號： | G01N33/569 | 分類號： | G01N33/569;G01N33/74;G01N33/558;G01N33/532 |
| 代理公司： | 北京匯捷知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11531 | 代理人： | 張利 |
| 地址： | 154007 黑龍江省*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 呼吸道 感染 快速 鑒定 試劑盒 及其 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種呼吸道感染用快速鑒定試劑盒及其鑒定方法，包括如下步驟：步驟一：制備抗體；步驟二：膠體金標記抗體；步驟三：試紙卡組裝：采用免疫層析法，制備膠體金免疫層析試紙條；步驟四：膠體金標抗體的驗證；步驟五：夾心抗體抗體驗證；步驟六：靈敏度優(yōu)化和步驟七：加速穩(wěn)定性測試。本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種能夠?qū)Σ《尽⒓毦⒅гw和真菌引起的呼吸道感染進行快速檢測和鑒別診斷的試劑盒，為臨床和家庭早期診斷、及時用藥治療、防治抗生素濫用提供技術(shù)支持。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體是指一種呼吸道感染用快速鑒定試劑盒及其鑒定方法。
背景技術(shù)
急性呼吸道感染是最常見的感染性疾病，在全球具有較高的發(fā)病率和死亡率。呼吸道病原體具有感染力強、傳播快、發(fā)病急等特點，在兒童、老人、慢性病、營養(yǎng)不良和免疫力低下等患者中，可引起嚴重的并發(fā)癥。抗生素為臨床治療呼吸道感染的一種常用藥物，但其對病毒引起的呼吸道感染無效。若發(fā)病早期不能給予患者正確的抗生素治療，則有可能發(fā)展為重癥肺炎。免疫功能低下、基礎(chǔ)疾病和醫(yī)源性因素可誘發(fā)肺部真菌感染，而真菌如人冠狀病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒等，目前均缺乏治療用的特效藥物，在病毒感染初期對病原學(xué)進行及時準確的診斷，有助于醫(yī)護人員精準掌握患者病情，也是急性呼吸道病毒性傳染病防控工作順利實施的重要保障。由于呼吸道不同病原體感染所致的臨床癥狀相似，影像學(xué)的表現(xiàn)缺乏特異性，若在未明確病原體的情況下盲目使用抗生素較易引發(fā)二重感染和抗生素耐藥的風(fēng)險，因而及早準確判斷疾病感染類型是合理應(yīng)用抗生素治療、縮短病程以及改善預(yù)后的基礎(chǔ)，且為臨床診斷治療、合理用藥和流行病監(jiān)控提供病原學(xué)參考依據(jù)。但是病原體生長緩慢，培養(yǎng)檢測的方法時間長，而現(xiàn)有檢測方法對操作人員技術(shù)有較高要求，需要借助大型檢驗儀器，檢驗成本高，如何能快速、多檢、簡便且準確的檢測呼吸道病原體一直是臨床醫(yī)生較難解決的問題。
發(fā)明內(nèi)容
針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服以上技術(shù)缺陷，提供一種能夠?qū)Σ《?、細菌、支原體和真菌引起的呼吸道感染進行快速檢測和鑒別診斷的試劑盒，為臨床和家庭早期診斷、及時用藥治療、防治抗生素濫用提供技術(shù)支持。
為了達到上述發(fā)明目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：本發(fā)明一種呼吸道感染用快速鑒定試劑盒及其鑒定方法，所述試劑盒通過如下步驟制得：
步驟一：制備抗體；
步驟二：膠體金標記抗體：
1)膠體金和抗體的結(jié)合：
用K2CO3和氯化氫溶液調(diào)節(jié)pH至蛋白質(zhì)沉淀點，將待標記的抗體依次稀釋后，分別與膠體金膠體液混勻3～5min后，加入1ml的質(zhì)量分數(shù)為10％的氯化鈉溶液迅速混勻，放置5min-2h，在580m波長時測定其光密度，確定抗體穩(wěn)定膠體金的最小濃度，接著將10％體積的蛋白質(zhì)溶液加于膠體金溶液中，反應(yīng)5～7min后加入牛血清白蛋白并調(diào)整至pH8.5，放置室溫繼續(xù)反應(yīng)；
2)膠體金抗體復(fù)合物的分離純化：
采用高速離心法進行純化，以去除未參與標記的過量的抗體、未完全穩(wěn)定的膠體金顆粒以及各種可能形成的聚合物，離心的溫度為4℃，離心的時間為30分鐘，離心轉(zhuǎn)速為10000rpm/min，離心后得上清液一和沉淀物一，取出上清液一重復(fù)上述離心操作，離心的溫度為4℃，離心的時間為30分鐘，離心轉(zhuǎn)速為10000rpm/min，二次離心后得上清液二和沉淀物二，摒棄上清液二，用與沉淀物二等體積的0.01mol/L的磷酸鹽緩沖溶液重新懸浮，并重復(fù)離心操作，離心的溫度為4℃，離心的時間為30分鐘，離心轉(zhuǎn)速為10000rpm/min，三次離心后得上清液三和沉淀物三，摒棄上清液三，取沉淀物三，用沉淀物三的0.01倍體積的0.01mol/L的磷酸鹽緩沖溶液與沉淀物三重新懸浮，并使用0.45μm濾膜過濾除菌，隨后在4℃的環(huán)境下保存；
3)膠體金標記抗體的鑒定：
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