[發明專利]根際假河桿菌、其培養分離方法和在煙草加香中的用途

有效

• 申請號: 202010426193.2
• 申請日: 2020-05-19
• 公開（公告）號: CN111733093B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發明（設計）人: 高莉;者為;段焰青;劉秀明;焦俊;周興奎;曾熠程;黨立志
• 申請（專利權）人: 云南中煙工業有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12P1/04;A24B3/12;C12R1/01
• 代理公司: 北京市領專知識產權代理有限公司 11590
• 代理人: 陳有業;任永利

本發明公開了根際假河桿菌(Pseudorivibacter rhizosphaerae)C1?9，其16S rDNA部分序列如序列表所示，其保藏編號為CGMCC NO:1.13864。本發明還公開了所述根際假河桿菌(Pseudorivibacter rhizosphaerae)C1?9培養分離方法和制備煙用香料的方法。本發明的根際假河桿菌為新的菌株，用其制備得到的煙用香料用于卷煙加香中，煙氣的煙香豐富性顯著增加，增加了煙氣的細膩性，刺激性降低。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及根際假河桿菌、其分離方法和在煙草加香中的用途。

背景技術

香精香料在食品、飼料、化妝品、化工和制藥等工業上具有重要地位，其來源主要包括天然與化學合成兩種方式。其中，化學合成的香精香料約占整個產品的85％，但化學合成的方法具有副產物多、產率低、高成本、污染環境等缺點。隨著綠色工業的倡導，天然香精香料越來越被人們所重視。天然香精香料主要來源于動物和植物，但動物、植物香料資源有限，提取成本高，遠遠滿足不了日益增長的市場需求。

煙草行業是重要的消費品制造行業，通過降焦減害以提高卷煙的安全性已成為煙草行業的共同目標。但隨著降低卷煙焦油量的下降，卷煙香氣成分不足的問題也越發凸顯。為彌補卷煙香氣和吃味的不足，添加煙用香精香料成為完善卷煙產品風格的決定性因素和提高卷煙香氣質量的一個有效手段。獲取風格特征各異、且具有良好安全性能的煙用香精香料也成為了煙草制品研發的重要方向之一。

煙草香精香料按照來源，分為來自煙草本身的香精香料、非煙草的天然香精香料和人工合成的香精香料。通過微生物制備的天然香料是近年來新興的煙用香料來源之一。微生物制備的香料是以天然原料為起始物，使用發酵技術、酶技術等產生的香料，也屬于天然香料；由于微生物制備的香料具有生產周期短，不受氣候影響，反應條件溫和，產品分離后形成的“三廢”少，對環境友好等多種優越性，使其逐漸成為產香植物的替代者。目前，通過微生物制備的煙用香料包括香蘭素、2-苯乙醇、類胡蘿卜素降解香料、多糖類及其他復合香料等。微生物制備香料具有原料易得，條件溫和、選擇性高等優勢。但目前能用的制備香料的微生物的優勢菌株種類并不多，所以篩選并開發應用新種類的產香微生物，以滿足煙用香精香料研發和生產需求，具有現實的必要性。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種新的菌株根際假河桿菌、其培養分離和鑒別方法；本發明的目的還在于提供所述的根際假河桿菌在煙草加香中的用途。

本發明通過以下技術方案實現上述目的。

除非另有說明，本發明中所采用的百分數均為質量百分數。

本發明的技術方案如下：

本發明第一方面公開了根際假河桿菌(Pseudorivibacter rhizosphaerae)C1-9，其16S rDNA部分序列如序列表所示，其保藏編號為CGMCC NO:1.13864。

本發明第二方面公開了所述的根際假河桿菌C1-9培養分離的方法，包括以下步驟：

①從自然環境中取土壤樣品，加無菌水，搖床振蕩，加無菌水繼續稀釋并涂布于R2A平板培養基上進行培養，挑選單菌落，純化，得到分離的微生物菌液，加入甘油、置于冰箱中備用；

②將步驟①分離的微生物菌液接種到R2A液體培養基中，搖床振蕩，培養至菌液濃度為光密度OD＝2.0，制得種子液；

③將步驟②制得的每一待測菌株的種子液接種在篩選培養基中，搖床振蕩，通過觀察發酵液外觀和香氣變化情況，篩選能產生香氣的微生物，即為根際假河桿菌(Pseudorivibacter rhizosphaerae)C1-9。

優選地，步驟③中所述篩選培養基的配方為：在R2A液體培養基的基礎上添加0.1g/L的類胡蘿卜素。