[發明專利]一種(R)-3-羥基丁酸的制備方法

在審

• 申請號: 202010425413.X
• 申請日: 2020-05-19
• 公開（公告）號: CN111534561A
• 公開（公告）日: 2020-08-14
• 發明（設計）人: 廖琪林
• 申請（專利權）人: 南京紐邦生物科技有限公司
• 主分類號: C12P41/00
• 分類號: C12P41/00;C12P7/42;C12P7/52;C12N1/20;C12R1/125;C12R1/15;C12R1/13
• 代理公司: 北京市盈科律師事務所 11344
• 代理人: 閆東偉

1.一種(R)-3-羥基丁酸的制備方法，其特征在于按照如下步驟進行：

以聚-β-羥丁酸為底物，按質量比2～2.2％的比例加入活化的菌，得到混合酶液，將上述混合酶液接入擴增培養基中，靜置培養1h，替換60％體積的擴增培養基，在溶氧3.0～3.2mg/L、溫度32～35℃的條件下，培養20～24h，每3h替換60％體積的擴增培養基；擴增后的混合酶液，按1:2的體積比加入發酵培養基，在溶氧4.5～4.8mg/L、溫度28～32℃的條件下進行好氧發酵，發酵過程中補入O₂和CO₂，培養40～72h，即得。

2.根據權利要求1所述的(R)-3-羥基丁酸的制備方法，其特征在于所述的活化的菌為枯草芽孢桿菌、谷氨酸棒桿菌、乳酸發酵短桿。

3.根據權利要求2所述的(R)-3-羥基丁酸的制備方法，其特征在于所述的活化的菌優選為谷氨酸棒桿菌。

4.根據權利要求1所述的(R)-3-羥基丁酸的制備方法，其特征在于所述的擴增培養基為：酵母粉4～6g/L，蛋白胨8～10g/L，氯化鈉8～10g/L，微量元素溶液1～1.2ml/L，pH為7.2～7.3。

5.根據權利要求4所述的(R)-3-羥基丁酸的制備方法，其特征在于擴增培養基中，所述的微量元素溶液含有：硫酸錳1.4g/L、乙二胺四乙酸二鈉1.0g/L、硼酸0.8g/L、硫酸銅0.2g/L、硫酸鋅0.2g/L、硅酸鈉0.2g/L、氯化鈷0.1g/L、鉬酸鈉0.05g/L、硫酸鎳0.05g/L。

6.根據權利要求1所述的(R)-3-羥基丁酸的制備方法，其特征在于所述的發酵培養基為：4～4.5g/L亞磷酸二氫鉀、3.5～3.6g/L硫酸銨、1.2～1.3g/L硫酸鎂、2～2.2g/L氯化銨、1～1.2g/L檸檬酸、0.090～0.11g/L氨芐青霉素、40～45g/L葡萄糖和1～1.2ml/L微量元素溶液，pH為6.9～7.0。

7.根據權利要求6所述的(R)-3-羥基丁酸的制備方法，其特征在于發酵培養基中，所述的微量元素溶液含有：三氯化鉻0.8g/L、硫酸鐵0.5g/L、氯化鈷0.3g/L、氯化鈣0.1g/L、硫酸鋅0.1g/L、硫酸銅0.06g/L、硫酸錳0.03g/L。

8.根據權利要求1所述的(R)-3-羥基丁酸的制備方法，其特征在于發酵過程補入O₂和CO₂的比例為1:6～8。

9.根據權利要求1所述的(R)-3-羥基丁酸的制備方法，其特征在于后處理步驟為：將所得發酵液，以2000～3000rpm離心10min，棄去沉淀，上清液經0.45μm的過濾器過濾后，再與活性炭混合攪拌20min，加入5kD超濾管，3200rpm離心60min，取濾液，通過陽離子交換樹脂，交換后，收集油狀物。