[發(fā)明專利]3-苯氨基丙羥肟酸的酶促微流控在線合成方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010425021.3
• 申請日: 2020-05-19
• 公開（公告）號: CN111690695A
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 杜理華;薛苗;龍瑞杰;楊夢婕;羅旭凌;羅錫平
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12P13/00
• 分類號: C12P13/00;C12M1/40;C12M1/00
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;朱思蘭

1.一種3-苯氨基丙羥肟酸(V)的酶促微流控在線合成方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)以甲醇為反應(yīng)溶劑、取代苯胺(I)和丙烯酸甲酯(II)為原料、脂肪酶Lipozyme RMIM為催化劑；將原料取代苯胺(I)和丙烯酸甲酯(II)各自用溶劑甲醇溶解后，分別置于注射器中，將脂肪酶Lipozyme RM IM均勻填充在微流控通道反應(yīng)器的反應(yīng)通道中，在注射泵的推動下，注射器中的取代苯胺(I)溶液和丙烯酸甲酯(II)溶液連續(xù)通入反應(yīng)通道中進(jìn)行邁克爾加成反應(yīng)，控制反應(yīng)溫度為30～55℃，反應(yīng)液在反應(yīng)通道內(nèi)連續(xù)流動的反應(yīng)時間為10～50min，通過產(chǎn)物收集器在線收集流出反應(yīng)通道的反應(yīng)液，經(jīng)后處理，得到產(chǎn)物3-苯氨基丙酸甲酯衍生物(III)；

通入反應(yīng)通道內(nèi)的反應(yīng)液中，取代苯胺(I)與丙烯酸甲酯(II)的物質(zhì)的量之比為1：0.5～8；

(2)以甲醇為反應(yīng)溶劑、步驟(1)所得3-苯氨基丙酸甲酯衍生物(III)和鹽酸羥胺(IV)為原料、甲醇鈉為催化劑；將3-苯氨基丙酸甲酯衍生物(III)溶于甲醇并置于注射器中，將鹽酸羥胺(IV)和甲醇鈉溶于甲醇并置于另一注射器中，在注射泵的推動下，兩個注射器中的料液連續(xù)通入反應(yīng)通道中進(jìn)行羥胺縮合反應(yīng)，控制反應(yīng)溫度為0℃，反應(yīng)液在反應(yīng)通道內(nèi)連續(xù)流動的反應(yīng)時間為10min，通過產(chǎn)物收集器在線收集流出反應(yīng)通道的反應(yīng)液，經(jīng)后處理，得到產(chǎn)物3-苯氨基丙羥肟酸(V)；

通入反應(yīng)通道內(nèi)的混合反應(yīng)液中，3-苯氨基丙酸甲酯衍生物(III)、鹽酸羥胺(IV)、甲醇鈉的物質(zhì)的量之比為1：1：2；

式(I)、(III)(V)中，R₁＝4-H，4-CH₃，4-C(CH₃)₃，4-OCH₃，4-Cl或4-Br。

2.如權(quán)利要求1所述3-苯氨基丙羥肟酸(V)的酶促微流控在線合成方法，其特征在于，步驟(1)中，所述取代苯胺(I)和丙烯酸甲酯(II)各自用溶劑甲醇溶解后，所得取代苯胺(I)溶液的濃度為0.5mmol/mL，丙烯酸甲酯(II)溶液的濃度為0.25～4mmol/mL。

3.如權(quán)利要求1所述3-苯氨基丙羥肟酸(V)的酶促微流控在線合成方法，其特征在于，步驟(1)中，催化劑脂肪酶Lipozyme RM IM的加入量以反應(yīng)介質(zhì)的體積計為0.043g/mL。

4.如權(quán)利要求1所述3-苯氨基丙羥肟酸(V)的酶促微流控在線合成方法，其特征在于，步驟(1)中，所述后處理方法為：將反應(yīng)液減壓蒸餾除去溶劑，進(jìn)行硅膠柱層析分離，用200-300目硅膠濕法裝柱，洗脫試劑為石油醚：乙酸乙酯體積比＝10：1的混合液，TLC跟蹤洗脫進(jìn)程，收集含目標(biāo)化合物的洗脫液，蒸除溶劑并干燥，得到產(chǎn)物3-苯氨基丙酸甲酯衍生物(III)。

5.如權(quán)利要求1所述3-苯氨基丙羥肟酸(V)的酶促微流控在線合成方法，其特征在于，步驟(1)中，通入反應(yīng)通道內(nèi)的反應(yīng)液中，取代苯胺(I)與丙烯酸甲酯(II)的物質(zhì)的量之比為1：4。

6.如權(quán)利要求1所述3-苯氨基丙羥肟酸(V)的酶促微流控在線合成方法，其特征在于，步驟(2)中，所述3-苯氨基丙酸甲酯衍生物(III)溶于甲醇后，所得溶液的濃度為0.1mmol/mL；所述鹽酸羥胺(IV)和甲醇鈉溶于甲醇后，所得溶液中鹽酸羥胺(IV)的濃度為0.1mmol/mL，甲醇鈉的濃度為0.2mmol/mL。

7.如權(quán)利要求1所述3-苯氨基丙羥肟酸(V)的酶促微流控在線合成方法，其特征在于，步驟(2)中，所述后處理的方法為：將反應(yīng)液減壓蒸餾除去溶劑，進(jìn)行硅膠柱層析分離，用200-300目硅膠濕法裝柱，洗脫試劑為甲醇：二氯甲烷體積比＝1：20的混合液，TLC跟蹤洗脫進(jìn)程，收集含目標(biāo)化合物的洗脫液，蒸除溶劑并干燥，得到產(chǎn)物3-苯氨基丙羥肟酸(V)。