[發明專利]一種光亮瘤蕨的離體快繁方法

有效

• 申請號: 202010423073.7
• 申請日: 2020-05-19
• 公開（公告）號: CN111448989B
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 唐健民;冼康華;韋霄;熊忠臣;鄒蓉;史燕財;柴勝豐;蔣運生
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區中國科學院廣西植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 瞿曉晶

本發明涉及一種光亮瘤蕨的離體快繁方法，屬于植物的組織培養技術領域。本發明所述方法包括以下步驟：1)將消毒后的光亮瘤蕨孢子接種于初代誘導培養基中進行初代培養，得到原葉體；2)將原葉體轉入孢子體誘導與繼代增殖培養基中進行繼代培養，得到孢子體；3)將孢子體轉入生根培養基中進行生根培養，得到生根苗。本發明方法簡單易操作，可實現光亮瘤蕨種苗大批量生產。

技術領域

本發明涉及植物的組織培養技術領域，具體涉及一種光亮瘤蕨的離體快繁方法，即促進光亮瘤蕨孢子體誘導和光亮瘤蕨的組織培養方法。

背景技術

光亮瘤蕨(Phymatosorus cuspidatus(D.Don)Pic.Serm)為水龍骨科(Polypodiaceae)瘤蕨屬石上附生植物，植株高約40～100厘米。根狀莖橫走，粗約2厘米，灰綠色，疏被鱗片；鱗片卵圓形，盾狀著生，褐色，邊緣不整齊。葉遠生；葉柄長約30～50厘米，禾稈色，粗壯，無毛；葉片一回羽狀，長約30～50厘米，寬約20～25厘米；羽片約8～15對，長約15～20厘米，寬約2～3.5厘米，頂端漸尖，基部具柄(柄長達1厘米)，邊緣全緣。側脈不明顯，小脈網狀。葉近革質，兩面光滑無毛。孢子囊群在羽片中脈兩側各1行，位于中脈與邊緣之間；孢子表面具很小的顆粒狀紋飾。在我國主要分布于云南、廣西、西藏、四川、貴州、廣東、海南等地，常見于海拔230～1600米林緣石灰巖石壁上(中國植物志)。光亮瘤蕨是一種傳統的中藥材，根狀莖可入藥，具有活血止痛、接骨消腫等功效。近年來，由于生境的破壞，野生資源日益減少，解決其繁殖問題顯得極為迫切。目前，對光亮瘤蕨的組培研究已有少量報道，但操作較為復雜，且培養周期長、孢子體誘導率低，成效甚微。

發明內容

本發明的目的在于提供一種光亮瘤蕨的離體快繁方法。本發明所述方法操作簡單，能夠在短時間內得到大量孢子體幼苗，孢子萌發率高，誘導出孢子體的效果好，批量生產光亮瘤蕨種苗，能夠為后期光亮瘤蕨集約化種植打基礎。

本發明提供了一種光亮瘤蕨的離體快繁方法，包括以下步驟：

1)將消毒后的光亮瘤蕨孢子接種于初代誘導培養基中進行初代培養，得到原葉體；所述初代誘導培養基以1/2MS為基礎培養基，還包括NAA0.2～0.5mg·L^-1、IAA 0.1～0.5mg·L^-1、活性炭1.0～2.0g·L^-1、蔗糖20～30g·L^-1和瓊脂3～4g·L^-1，pH 5.0～5.8；

2)將步驟1)得到的原葉體轉入孢子體誘導與繼代增殖培養基中進行繼代培養，得到孢子體；所述孢子體誘導與繼代增殖培養基以MS為基礎培養基，還包括6-BA 0.2～1.0mg·L^-1、IBA 0.02～0.1mg·L^-1、ZnSO₄ 0.2～1.0mg·L^-1、蔗糖20～30g·L^-1和瓊脂3～4g·L^-1，pH 5.0～5.8；

3)將步驟2)得到的孢子體轉入生根培養基中進行生根培養，得到生根苗；所述生根培養基以1/2MS為基礎培養基，還包括NAA 0.1～1.0mg·L^-1、蔗糖20～30g·L^-1和瓊脂3～4g·L^-1，pH 5.0～5.8。

優選的是，步驟1)所述消毒的方法包括以下步驟：

將長有成熟孢子囊的光亮瘤蕨羽片在質量百分含量為0.2％的洗衣粉水中浸泡5～12min，刷洗并用流水沖洗羽片表面，用體積百分含量為75％酒精表面消毒30～60s，0.1％HgCl₂消毒3～10min，無菌水漂洗、吸干，將孢子囊剝離于羽片，得到消毒后的光亮瘤蕨孢子。