[發明專利]一種大花序桉1203品種的組培快繁方法

在審

• 申請號: 202010421494.6
• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN111492975A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 詹定舉;吳兵;沈云;龐貞武;黃全東;梁彩娟;黃漢寧;孫雪陽;吳滿芳;呂華麗;覃漢夫;徐香梅;俸榮娣;秦麗
• 申請（專利權）人: 廣西八桂林木花卉種苗股份有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南寧市來來專利代理事務所(普通合伙) 45118
• 代理人: 來光業

1.一種大花序桉1203品種的組培快繁方法，其特征在于：采用大花序桉優良種源的優良單株，對其進行伐倒促萌，采集芽條誘導無菌芽，經過對無菌芽的繼代培養、生根培養以及容器育苗，獲得再生植株；

所述的大花序桉1203品種的組培快繁方法，具體包括如下步驟：

（1）外植體建立：從澳大利亞引種的大花序桉優良種源林分中篩選優良單株，從30cm處伐倒促萌，選擇健壯半木質化萌芽條，用水浸泡帶回實驗室，去除頂端幼嫩部分和葉片，剪成3-5cm的莖段，用自來水沖洗35-45min，再用飽和洗衣粉溶液洗滌13-15min，而后用自來水沖洗干凈；

（2）外植體消毒：將步驟（1）得到的外植體置于高壓滅菌處理過的廣口瓶中，倒入體積濃度75%的酒精溶液浸泡20s，倒掉酒精用無菌水清洗2-3次，置于10%次氯酸鈉溶液中并適當攪拌，消毒20-22min，倒去次氯酸鈉溶液，用無菌水清洗3-4次；

（3）無菌芽誘導：將消毒處理的外植體置于高壓滅菌處理的接種碟上，使用滅菌處理的鑷子、手術刀將接觸藥液的芽條兩端切口切除，而后把芽條切成長度1-2cm的帶芽莖段，接種到以試管為載體的誘導培養基上；棉布袋包裹后置于冰箱中4-8℃下暗培養7天，而后拿出插入試管架見光培養，光照強度2000-2500lux，溫度25±2℃，培養25-30天；

（4）繼代培養：當無菌萌芽長到1cm以上，選取無污染的無菌芽，用鑷子從試管抽出外植體，切割后將無菌芽轉入以廣口瓶為載體的繼代增殖培養基中，全光培養光照強度1500-2000lux，培養7-10天，增大光照強度至2000-3000lux，以促進叢芽增殖和生長，當叢生芽長到1-2cm時，轉瓶到新的增殖培養基上繼代培養，獲取大量繼代苗；

（5）生根培養：當繼代苗達到一定量后，開始生根培養；剪取1.0-1.2cm的頂芽接入生根培養基中培養，培養溫度25±2℃；

（6）煉苗：在培養室培養10天后，切口冒出根點或短根，將生根瓶苗撿出，轉移到大棚煉苗；煉苗20-30天，使芽苗適應自然光照和晝夜溫差，使之成為成熟的生根苗；煉苗過程中控制光照強度8000Lx～10000 Lx和環境溫度25℃～30℃，避免強光和高溫灼傷芽苗；

（7）移栽：煉苗25-30天，根長至1-3cm，苗高3cm以上，洗去培養基，移栽至0.5%高錳酸鉀溶液消毒過的營養杯中，培養88-95天，得到再生植株；

（8）移栽后肥料管理：苗木移入營養杯14-16天進行施肥，用質量濃度0.2%的復合肥水溶液噴葉面，噴完立即用清水清洗苗木；每隔7天噴1次，遇到低溫或雨天可延長；隨苗木的生長，當苗高達到12-13公分，可加大施肥濃度，并可適當增加鉀肥的用量，促進苗木木質化，待苗高達20公分時，停止施肥。

2.根據權利要求1所述的大花序桉1203品種的組培快繁方法，其特征在于：從澳大利亞引種的大花序桉優良種源，通過栽培試驗、測定分析，經過測量胸徑、樹高、蓄積、連年生長量、木材材性以及干形指標，綜合對比后，在適合本地生長的種源中選擇優樹。

3.根據權利要求1所述的大花序桉1203品種的組培快繁方法，其特征在于：步驟（3）無菌芽誘導中，所述的誘導培養基為：改良MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.4mg/L+L-半胱氨酸2.0mg/L+核黃素15mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂 4g/L，pH5.8-6.2。

4.根據權利要求1所述的大花序桉1203品種的組培快繁方法，其特征在于：步驟（4）繼代培養中，所述的繼代增殖培養基為：改良MS+6-BA0.8mg/L +NAA 0.3mg/L+核黃素12mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂 4g/L，pH5.8-6.2。

5.根據權利要求1所述的大花序桉1203品種的組培快繁方法，其特征在于：步驟（5）生根培養中，所述的生根培養基為：1/2改良MS+ABT₁2.0mg/L +IAA 2.0mg/L+維生素C 5mg/L+活性炭20mg/L+蔗糖15g/L+瓊脂 4g/L，pH5.8-6.2。