[發明專利]一種大花序桉1204品種的組培快繁方法

在審

• 申請號: 202010420296.8
• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN111492974A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 孫雪陽;龐貞武;黃漢寧;詹定舉;沈云;吳兵;覃漢夫;黃全東;俸榮娣;徐香梅;呂華麗;吳滿芳;梁彩娟;梁寧華
• 申請（專利權）人: 廣西八桂林木花卉種苗股份有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南寧市來來專利代理事務所(普通合伙) 45118
• 代理人: 來光業

1.一種大花序桉1204品種的組培快繁方法，其特征在于：采用大花序桉優良種源的優良單株伐倒促萌，采集芽條誘導無菌芽，通過繼代培養、生根培養以及容器育苗，獲得再生植株；

所述的大花序桉1204品種的組培快繁方法，具體包括如下步驟：

（1）從澳大利亞引種的大花序桉優良種源林分中篩選優樹，從離地面25cm處伐倒促萌，注意砍樹的方向確保倒樹不撕裂樹樁，然后用百菌清、多菌靈800倍液噴灑樹樁，并在樹樁周圍施用白蟻藥；

（2）伐倒38-42天，選擇健壯半木質化萌芽條，用水浸泡帶回實驗室，去除頂端幼嫩部分和葉片，剪成4-5cm的莖段，在自來水下沖洗20-25min，再用飽和洗衣粉溶液洗滌10-12min，而后用自來水沖洗干凈；

（3）將外植體置于高壓滅菌處理過的廣口瓶中，倒入75%酒精溶液浸泡20-30s，倒掉酒精用無菌水清洗2-3次，置于10%次氯酸鈉溶液中并適當攪拌，消毒12min，倒去次氯酸鈉溶液，用無菌水清洗3-4次；

（4）將消毒處理的外植體置于高壓滅菌處理的接種碟上，使用滅菌處理過的鑷子、手術刀將接觸藥液的芽條兩端切口切除，而后把芽條切成長度1-2cm的帶芽莖段，接種到以試管為載體的誘導培養基上，棉布袋包裹后置于冰箱中于4-8℃下暗培養7天，而后拿出插入試管架見光培養，光照強度2000-2500lux，溫度25±2℃，培養25-30天；

（5）將誘導獲得的無菌材料在無菌條件下進行再次切割，放入繼代培養基中進行繼代培養加速繁殖，使之形成叢芽；在芽增殖過程中，定期將培養材料轉接至新鮮繼代培養基，使之在短期內加大芽的繁殖數量，以達到快速繁殖的目的；暗培養7-10天，而后見光培養，光照強度2000-3000lux，溫度25±2℃，25-28天繼代一輪；

（6）當繼代苗達到一定量后，開始生根培養；剪取1.0-1.2cm的頂芽接入生根培養基中，接種好的生根瓶苗在培養室內培養7-9天，光照強度2000-2500lux，溫度25±2℃；

（7）在培養室培養7-9天后，切口冒出根點或短根，將生根瓶苗撿出，轉移到大棚煉苗；煉苗22-30天，使芽苗適應自然光照和晝夜溫差，使之成為成熟的生根苗，煉苗過程中控制光照強度8000Lx～10000 Lx和環境溫度25℃～30℃，避免強光和高溫灼傷芽苗；

（8）煉苗25-30天，根長至1-3cm，苗高3cm以上，洗去培養基，移栽至0.5%高錳酸鉀溶液消毒的營養杯中，培養88-95天，得到再生植株；

（9）苗木移入營養杯14-15天進行施肥，用質量濃度0.2%復合肥水溶液噴葉面，噴完立即用清水清洗苗木；每隔7天噴1次，遇到低溫或雨天可延長；隨苗木的生長，當苗高達到11-13公分，可加大施肥濃度，并可適當增加鉀肥的用量，促進苗木木質化，待苗高達20公分時，停止施肥。

2.根據權利要求1所述的大花序桉1204品種的組培快繁方法，其特征在于：從澳大利亞引種的大花序桉優良種源，通過栽培試驗、測定分析，經過測量胸徑、樹高、蓄積、連年生長量、木材材性以及干形指標，綜合對比后，在適合本地生長的種源中選擇優樹。

3.根據權利要求1所述的大花序桉1204品種的組培快繁方法，其特征在于：步驟（4）中，所述的誘導培養基為：改良MS+6-BA2.0mg/L+L-半胱氨酸2.0mg/L+核黃素10mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂 3.8g/L，PH5.8-6.2。

4.根據權利要求1所述的大花序桉1204品種的組培快繁方法，其特征在于：步驟（5）中，所用繼代培養基為：改良MS+6-BA1.0mg/L +IBA 0.5mg/L+核黃素10mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂3.8g/L，PH5.8-6.2。

5.根據權利要求1所述的大花序桉1204品種的組培快繁方法，其特征在于：步驟（6）中，所述的生根培養基為：1/3改良MS+ABT₁ 1.5mg/L +IAA 1.5mg/L+N-甲基吡咯烷酮0.5g/L+蔗糖20g/L+瓊脂 3.8g/L，PH5.8-6.2。