[發明專利]一種龍膽山酮酚在制備抗肺癌藥物中的應用

在審

• 申請號: 202010420030.3
• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN111617068A
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發明（設計）人: 駱亞莉;劉永琦;李研;靳曉杰;李程豪;王碧雯
• 申請（專利權）人: 甘肅中醫藥大學
• 主分類號: A61K31/352
• 分類號: A61K31/352;A61P35/00;C12Q1/18;C12Q1/02
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 高松

1.龍膽山酮酚在制備抗肺癌藥物中的應用，其特征在于,所述龍膽山酮酚的分子式為：C₁₄H₁₀O₆，化學結構為：

2.根據權利要求1所述的龍膽山酮酚在制備抗肺癌藥物中的應用，其特征在于,所述抗肺癌藥物用來抑制人肺癌A549細胞的增殖。

3.根據權利要求1所述的龍膽山酮酚在制備抗肺癌藥物中的應用，其特征在于,所述龍膽山酮酚的給藥濃度為25-100μM。

4.根據權利要求3所述的龍膽山酮酚在制備抗肺癌藥物中的應用，其特征在于,所述龍膽山酮酚的藥效濃度為50-100μM。

5.根據權利要求1-4任一項所述的龍膽山酮酚在制備抗肺癌藥物中的應用，其特征在于,所述龍膽山酮酚對人肺癌A549細胞的作用時間為24-120h。

6.根據權利要求5所述的龍膽山酮酚在制備抗肺癌藥物中的應用，其特征在于,所述龍膽山酮酚對人肺癌A549細胞的作用時間為72h。

7.一種驗證如權利要求1或2所述的龍膽山酮酚具有抗擊肺癌功能的方法，其特征在于,包括如下步驟：

S1:取對數生長期的肺癌A549細胞株、正常人肺上皮Beas-2b細胞株，保證活細胞數量達95％以上，PBS洗滌加胰酶消化，離心去除上清液，調整細胞濃度至2×10⁶/ml后移至-80℃冰箱中保存；

S2：龍膽山酮酚用DMSO溶解，過濾除菌，于-20℃冰箱避光保存備用，實驗前稀釋至所需濃度；

S3：從-80℃冰箱中取出凍存人肺癌A549細胞，投入37℃電熱恒溫水浴箱中晃動融化凍存液并消毒離心去上清液，離心管中加入培養基吹打混勻后將細胞懸液移到培養瓶中置于37℃、5％CO₂飽和濕度的培養箱中，次日換液觀察細胞貼壁情況；

S4：棄凈細胞培養瓶中的舊培養液，PBS沖洗細胞，加胰酶消化后，離心去上清液，向離心管中加細胞全培養基吹打混勻后將細胞懸液移到培養瓶中，置于37℃、5％CO₂飽和濕度的培養箱中，次日換液觀察細胞貼壁情況，每2-3天換液一次，進行細胞傳代；

S5：設立正常人肺上皮Beas-2b細胞株為空白組，龍膽山酮酚為干預組，人肺癌A549細胞為實驗組，每個組設三個平行孔；

S6：CCK8法測定龍膽山酮酚對人肺癌A549細胞株增殖的抑制率，記錄數據；

S7：CCK8法測定龍膽山酮酚對正常人肺上皮Beas-2b細胞株的存活率，記錄數據；

S8：取誘導72h后各組處于對數生長期的人肺癌A549細胞培養72h后，HE染色觀察干預72h后各組細胞的形態變化，記錄狀態；

S9：取各組生長至對數期的細胞,消化收集細胞,并進行細胞計數，然后用流式細胞儀檢測干預72h后各組細胞的凋亡情況，記錄數據；

S10：蛋白電泳檢測干預72h后各組細胞的Caspase8/3蛋白表達量，記錄數據；

S11：完成S1-S9步驟后，對得到的數據均用SPSS24.0統計軟件進行One-way ANOVA(單因素方差分析)檢驗分析，最終得出結論。