[發明專利]一種利用核桃粕制備二肽基肽酶Ⅳ抑制活性肽的方法及其應用

有效

• 申請號: 202010419688.2
• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN111549085B
• 公開（公告）日: 2023-07-21
• 發明（設計）人: 孔祥珍;張麗娜;華欲飛;宋偉光;張彩猛;陳業明;李興飛
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/14;C07K1/34
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;張仕婷

一種利用核桃粕制備二肽基肽酶Ⅳ抑制活性肽的方法及其應用，屬于植物蛋白質深加工技術領域。本發明以脫脂核桃粕為原料，首先對其進行醇洗、酸洗和高速剪切處理，加入堿性蛋白酶水解得到酶解液；經脫鹽和干燥得到二肽基肽酶Ⅳ抑制活性肽。本發明方法制備的核桃肽具有良好的降血糖和抗氧化功能活性，產品得率和蛋白質含量高，實現了核桃粕的深加工和綜合利用，對于提高其附加值具有重要意義。

技術領域

本發明涉及一種利用核桃粕制備二肽基肽酶Ⅳ抑制活性肽的方法及其應用，屬于植物蛋白質深加工技術領域。

背景技術

糖尿?。―M）是一種與高血糖相關的代謝性疾病，是全球范圍內的常見病。糖尿病有兩種類型，胰島素依賴型糖尿?。↖型糖尿?。┖头且葝u素依賴型糖尿?。↖I型糖尿?。型糖尿?。═1DM）是由于自身免疫反應破壞了胰島β細胞而導致胰腺無法分泌胰島素而引起的。II型糖尿?。═2DM）是由胰島素產生不足或人體無法利用產生的胰島素引起的復雜疾病。II型糖尿病發病率呈逐步上升趨勢，大約占診斷病例的90%~95%，給社會、健康和經濟造成沉重負擔。目前尚未發現可以治愈T2DM的藥物。現有藥物主要通過控制血糖水平的升高，增加機體對胰島素的敏感性以及減少高血糖癥對機體造成的損害來發揮作用。

二肽基肽酶IV（DPP-IV）是一種絲氨酸蛋白酶，廣泛分布在人體的許多組織中，負責腸降血糖素激素胰高血糖素樣肽1（GLP-1）和葡萄糖依賴性促胰島素多肽（GIP）的降解和失活。DPP-IV抑制劑可以延長GLP-1和GIP的作用，從而刺激胰島素分泌來調節血糖水平，因此成為治療T2DM的最新手段。現在一些化學合成的DPP-IV抑制劑，例如西他列汀、維達列汀和沙格列汀等，是臨床上治療糖尿病的有效藥物，但是，這些藥物價格昂貴，治療糖尿病的同時會產生副作用，長期安全性尚未確立。所以，從天然食物蛋白質中提取具有DPP-IV抑制作用的活性成分，具有重大意義。目前，食源性植物蛋白肽已經表現出對DPP-IV的抑制作用。

核桃在我國的栽培面積和產量均位于世界前列，自身豐富的生理活性組分使其具有健腦益智的功效。核桃蛋白含有大量的精氨酸、谷氨酸和天冬氨酸，精氨酸作為一氧化氮（NO）合成的前體，在調控人體生理活動方面起著重要作用，其生成的NO有利于促進血管舒張和增強機體免疫活性；谷氨酸具有改善神經機能的作用，通過在體內參與γ-氨基丁酸（GABA）的合成，進而促進大腦的能量代謝，增加氧供給量。核桃蛋白營養價值獨特，而且含有豐富的生物活性肽序列，是開發活性多肽的良好來源。

近年來，核桃油的市場需求量不斷增加，脫脂核桃粕作為核桃油加工副產品，蛋白含量高達50%以上，但是由于蛋白質深加工技術的局限，核桃粕通常被用作飼料或者肥料，造成核桃資源的浪費。因此，通過酶解技術制備具有抗氧化活性和DPP-IV抑制活性的核桃多肽，不僅有利于拓寬核桃蛋白的應用范圍并促進天然抗氧化劑和降血糖食品的開發。

發明內容

本發明的目的是克服上述不足之處，提供一種利用核桃粕制備二肽基肽酶Ⅳ抑制活性肽的方法及其應用，通過此方法制備的活性肽得率和蛋白質含量較高，具有良好的抗氧化活性和二肽基肽酶Ⅳ抑制活性。

本發明的技術方案，一種利用核桃粕制備二肽基肽酶Ⅳ抑制活性肽的方法，其特征在于步驟如下：

（1）醇洗：對脫脂核桃粕進行醇洗處理，得到醇洗核桃粕；

（2）酸洗：對醇洗核桃粕進行酸洗處理，得到核桃蛋白凝乳；

（3）剪切：將核桃蛋白凝乳與去離子水混合，進行高速剪切處理；

（4）水解：加入堿性蛋白酶在一定條件下進行酶水解得到粗酶解液；

（5）后處理：粗酶解液經脫鹽與干燥后得到粉狀的二肽基肽酶Ⅳ抑制活性肽。

進一步地，步驟（1）中，取脫脂核桃粕粉加入4~6倍體積、體積濃度為85%的乙醇溶液，在40~50℃的條件下攪拌洗滌0.5~2?h，之后抽濾；取出濾餅在30~40℃干燥以除去殘余乙醇，得到醇洗核桃粕。