[發(fā)明專利]一種基于鑭系金屬自發(fā)光Au@Eu-MOFs的競爭型免疫傳感器的制備方法

有效

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• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN111721826B
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發(fā)明（設計）人: 趙冠輝;魏琴;任祥;吳丹;馬洪敏;曹偉;張勇
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48;G01N27/327;G01N27/30;G01N21/76;G01N33/53;G01N33/58
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業(yè)) 37240
• 代理人: 趙鳳

1.一種基于鑭系金屬自發(fā)光Au@Eu-MOFs的競爭型免疫傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下：

（1）納米花狀NiFe復合物的制備

將130 mg ~ 170 mg六水合硝酸鎳、130 mg ~ 170 mg九水合硝酸鐵、20 mg ~ 30 mg尿素和60 mg ~ 80 mg檸檬酸三鈉加入10 mL ~ 30 mL超純水中，磁力攪拌5 min，得到Ni和Fe比率為1:1的混合溶液，轉移至50 mL聚四氟乙烯內襯高壓反應釜中，140 ℃ ~ 160 ℃反應24 h ~ 72 h，得到棕褐色產(chǎn)物，超純水和乙醇分別洗滌兩次，40 ℃ ~ 60 ℃真空干燥箱干燥12 h，即得到納米花狀NiFe復合物；

（2）自發(fā)光納米多孔材料Au@Eu-MOFs的制備

將30 mg ~ 40 mg六水合氯化銪和5 mmoL ~ 15 mmoL硼酸加入N, N-二甲基甲酰胺（DMF）:超純水為7:3的混合溶液中，磁力攪拌1 h ~ 3 h，轉移至50 mL聚四氟乙烯內襯高壓反應釜中，140 ℃ ~ 160 ℃反應6 h ~ 18 h，乙醇和超純水分別洗滌兩次，40 ℃ ~ 60 ℃真空干燥箱干燥12 h，即得到白色產(chǎn)物Eu-MOFs；

將30 mg ~ 50 mg納米多孔Eu-MOFs分散在50 mL超純水中，加入1 mL ~ 3 mL、1% ~ 3%的氯金酸溶液，室溫下攪拌5 min，加入4 mg ~ 6 mg聚乙烯吡咯烷酮抑制金納米粒子的團聚，然后加入70 mg ~ 90 mg還原劑檸檬酸三鈉，0.5 mg ~ 1 mg硼氫化鈉，室溫下攪拌8 h~ 12 h，溶液慢慢變成紫黑色，離心分離懸浮物，超純水洗滌至上清液無色，35 ℃真空干燥12 h，得到紫黑色固體Au@Eu-MOFs；

（3）Au@Eu-MOFs標記DON-BSA偶聯(lián)抗原孵化物溶液的制備

將6 mg ~ 10 mg的Au@Eu-MOFs分散于1 mL pH 7.5的PBS中，加入4 μL ~ 6 μL、6 mg/mL的DON-BSA偶聯(lián)抗原，4 ℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h ~ 24 h，4 ℃離心分離洗去未結合的DON-BSA偶聯(lián)抗原，然后加入1 mL 0.1%的牛血清白蛋白溶液4 ℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化2 h ~ 4 h封閉DON-BSA偶聯(lián)抗原表面的非特異性活性位點，4 ℃離心分離洗去未結合的牛血清白蛋白，最后分散于pH 7.5的PBS緩沖溶液中，制得0.5 mg/mL ~ 5 mg/mL的Au@Eu-MOFs標記DON-BSA偶聯(lián)抗原溶液，儲存于4 ℃中備用；

（4）分別用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm的氧化鋁拋光粉對直徑4 mm的玻碳電極做拋光處理，用超純水沖洗干凈；

（5）將6 μL、0.5 mg/mL ~ 5 mg/mL NiFe納米花復合物水溶液滴涂至電極表面，室溫下晾干；

（6）將2 μL ~ 4 μL、10 mg NHS和20 mg EDC的混合溶液滴于電極表面用來活化NiFe復合物表面的羧基基團，用pH 7.5的PBS緩沖溶液沖洗電極表面，晾干；

（7）將6 μL、8 μg/mL ~ 12 μg/mL的水溶性脫氧雪腐鐮刀菌醇（DON）抗體溶液孵化滴涂到電極表面通過酰胺反應和基底材料連接，用pH 7.5的PBS緩沖溶液沖洗，4 ℃晾干；

（8）將2 μL ~ 4 μL體積分數(shù)為0.5%的牛血清白蛋白溶液滴涂到電極表面，以封閉電極表面上非特異性活性位點，用pH 7.5的PBS緩沖溶液沖洗，4 ℃晾干；（9）將6 μL、一定濃度的水溶性脫氧雪腐鐮刀菌醇（DON）標準溶液滴加到電極表面，用pH 7.5的PBS緩沖溶液沖洗，4 ℃晾干；

（10）將6 μL、0.5 mg/mL ~ 5 mg/mL的Au@Eu-MOFs標記DON-BSA孵化抗原溶液滴加到電極表面，4 ℃晾干，用pH 7.5的PBS緩沖溶液沖洗，制得一種基于自發(fā)光Au@Eu-MOFs的競爭型電致化學發(fā)光免疫傳感器。

2.如權利要求1所述制備方法制得的一種基于鑭系金屬自發(fā)光Au@ Eu-MOFs的競爭型免疫傳感器對谷物中水溶性脫氧雪腐鐮刀菌醇（DON）的檢測，其特征在于，檢測步驟如下：

（1）使用電化學工作站的三電極體系進行測試，Ag/AgCl電極作為參比電極，鉑絲電極為對電極，所制備的競爭型免疫傳感器為工作電極，將電化學工作站和化學發(fā)光檢測儀連接在一起將光電倍增管的高壓設置為500 V，循環(huán)伏安掃描電位范圍為0 ~ 1.4 V，掃描速率為0.1 V/s；

（2）在10 mL、pH 6.0 ~ 8.5的含濃度為1 mmol/L ~ 12 mmol/L三丙胺的PBS緩沖溶液中，通過電化學發(fā)光方法，檢測對不同濃度的DON溶液產(chǎn)生的電化學發(fā)光信號強度，繪制工作曲線；

（3）將待測樣品溶液代替DON溶液進行測定。