[發明專利]一種有效獲取大花序桉無菌幼化芽的方法

有效

• 申請號: 202010417733.0
• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN111418494B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發明（設計）人: 鄧紫宇;唐慶蘭;郭東強;任世奇;盧翠香;劉媛;陳升侃;李昌榮;伍琪;陳健波;周維;甘春雁
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南寧深之意專利代理事務所(特殊普通合伙) 45123
• 代理人: 盧穎

本發明公開了一種有效獲取大花序桉無菌幼化芽的方法，包括優樹選擇、水培促萌、外植體采集及處理、誘導培養和幼化培養工序，選擇大花序桉優樹，在優樹中上部選取直徑3?4cm，完全木質化且帶潛伏芽的枝條，帶回培養室進行水培，待潛伏芽萌發并生長至3?4cm時，剪取莖段作為外植體并進行消毒后，接種于誘導培養基中進行誘導培養，將獲得的大花序桉初始芽接種到幼化培養基上進行幼化培養，最后獲得生長健壯、活力旺盛的大花序桉無菌幼化芽。本發明的外植體獲取率高，獲得的無菌幼化芽生長健壯、活力旺盛，為后續的繼代培養、生根培養打下了堅實的基礎，滿足大花序桉的規?；a。

技術領域

本發明屬于林業科學中的林木組織培養育苗技術領域，涉及桉樹組培方法，尤其是涉及一種有效獲取大花序桉無菌幼化芽的方法。

背景技術

大花序桉（Eucalyptus cloeziana）為桃金娘科桉樹屬大喬木樹種，自然分布于澳大利亞昆士蘭州中部和北部，原產地樹高35～40m，最高可達40～55m，胸徑可達1～2m。該樹種生長迅速，干形通直、圓滿，自然整枝良好。9年生開始開花結實，花期長，從花芽形成至成熟果實約需16個月。木材黃褐色，紋理通直，結構均勻，沉重、堅固、硬度高、耐久，在巴西有“桃花心木”之尊稱，為高貴木材之意，是一種很好的鋸材，可用于高級家具、實木地板、機械構件、建筑、礦柱、坑木等。

利用植株嫩莖直接誘導無菌芽是桉樹工廠化組培苗生產的主要途徑，桉樹具有很強的萌芽再生能力，伐根上具有很多休眠芽或不定芽，尤其是幼、中齡林，半木質化帶潛伏芽的萌芽條是桉樹組培最佳外植體選擇。專利號為201510976324.3的發明專利公開了一種大花序桉的組培快繁方法，該方法采用大花序桉優良家系的優良單株，伐倒后促生萌芽，利用萌芽作為外植體，以帶有潛伏芽的莖段離體誘導無菌芽，無菌芽的獲得，不經過愈傷組織成苗途徑，而直接由外植體莖段萌生側芽或不定芽，經過無菌芽進行繼代增殖培養、生根培養和生根苗移栽，獲得再生植株。該發明采用了伐樁萌芽作為外植體材料，優樹是林木高世代改良的重要遺傳資源應就地保存，大花序桉與大部分的桉樹樹種不同，更新效果較差，環割萌芽率不足5%且易導致植株死亡，伐樁萌芽率不足20%且個體間差異顯著，常常存在優樹伐倒后不萌芽的情況，已經萌發的萌芽條在生長過程中也容易死去，大花序桉環割促萌或伐樁促萌不僅效率低而且容易造成重要遺傳資源的損失，然而直接以樹干上枝條的嫩芽為外植體進行組織培養誘導萌芽率低且因萌動芽繼承了母體的生理年齡而不能直接進行繼代培養，幼化技術困難，大花序桉內生菌也經常導致僅有的萌動芽污染死亡，因此，高效安全獲取大花序桉無菌幼化芽較難，影響下步工作的順利開展，難以進行規模化生產。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，提供了一種有效獲取大花序桉無菌幼化芽的方法，克服大花序桉無性繁殖困難的缺陷，滿足大花序桉的規?；a。

為了實現上述目的，本發明的技術方案如下：

一種有效獲取大花序桉無菌幼化芽的方法，包括優樹選擇、水培促萌、外植體采集及處理、誘導培養和幼化培養工序，選擇大花序桉優樹，在優樹中上部選取直徑3-4cm，完全木質化且帶潛伏芽的枝條，帶回培養室進行水培，待潛伏芽萌發并生長至3-4cm時，剪取莖段作為外植體并進行消毒后，接種于誘導培養基中進行誘導培養，將獲得的大花序桉初始芽接種到幼化培養基上進行幼化培養，最后獲得生長健壯、活力旺盛的大花序桉無菌幼化芽；

主要操作步驟如下：

（1）優樹選擇

選擇樣地內樹高、胸徑、單株材積等生長指標前5%，且無病蟲害、干形通直、分枝小的大花序桉個體為優樹；

（2）水培促萌

選擇優樹中上部直徑3-4cm，完全木質化且帶潛伏芽的枝條，剪取60cm長去除葉片，帶回培養室進行水培，每隔4天用體積濃度為2%的綠茶提取物對枝條進行一次噴灑殺菌；

（3）外植體采集及處理