[發明專利]一種利用發根農桿菌誘導產生玫瑰毛狀根的方法在審
| 申請號： | 202010417330.6 | 申請日： | 2020-05-18 |
| 公開（公告）號： | CN111500625A | 公開（公告）日： | 2020-08-07 |
| 發明（設計）人： | 馮立國;曾雨倩;王建文 | 申請（專利權）人： | 揚州大學 |
| 主分類號： | C12N15/84 | 分類號： | C12N15/84;A01H5/06;A01H6/74 |
| 代理公司： | 揚州蘇中專利事務所(普通合伙) 32222 | 代理人： | 許必元 |
| 地址： | 225009 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 發根 桿菌 誘導 產生 玫瑰 毛狀根 方法 | ||
1.一種利用發根農桿菌誘導產生玫瑰毛狀根的方法，其特征是，包括以下步驟：
（1）發根農桿菌保存、活化與侵染液的制備；
（2）外植體的預培養和共培養；
（3）農桿菌侵染誘導毛狀根；
（4）毛狀根液體增值培養。
2.根據權利要求1所述的一種利用發根農桿菌誘導產生玫瑰毛狀根的方法，其特征是，步驟（1）中，侵染液的制備：
在無菌條件下，接種根癌農桿菌ATCC15834活化菌液50μL于50mL YEB液體培養基中，28°C 、200 rpm震蕩培養至OD600=0.5；
取菌液5000 rpm離心5~10 min后去上清，加入等體積的1/2MS液體培養基，重懸混勻，置于28°C、100~110 rpm搖床震蕩培養20~30 min后得到侵染液。
3.根據權利要求1所述的一種利用發根農桿菌誘導產生玫瑰毛狀根的方法，其特征是，步驟（2）中，外植體的預培養和共培養：
在無菌條件下，將玫瑰組培苗幼嫩葉片切成0.6cm2的小塊，背面向上于固體培養基培養2d后；浸入菌液輕搖5~20 min，吸干表面菌液后置于固體培養基上暗培養2~3 d。
4.根據權利要求1所述的一種利用發根農桿菌誘導產生玫瑰毛狀根的方法，其特征是，步驟（3）中，毛狀根的誘導：
將共培養葉片進行洗菌，置于附加300mg/L特美汀的培養基，在25±2℃黑暗條件下誘導培養一周，轉入添加200 mg/L特美汀的除菌培養基中，7~9天轉接一次，依次降低濃度，直至完全無菌，20d后誘導出的毛狀根。
5.根據權利要求1所述的一種利用發根農桿菌誘導產生玫瑰毛狀根的方法，其特征是，步驟（4）中，毛狀根液體增殖培養：
將誘導至3~5cm毛狀根的根株切下培養，挑選生長迅速、根系粗壯、分支較多、無向地性的毛狀根轉移到液體培養基中，25℃、120rpm黑暗中震蕩進行擴大培養，獲得大量生長的毛狀根。
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