[發明專利]一種防控梨葉片異常脫落的方法

在審

• 申請號: 202010417147.6
• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN111699897A
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發明（設計）人: 王鵬;郝紫微;張紹鈴;吳巨友;謝智華;齊開杰
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: A01G17/00
• 分類號: A01G17/00;A01G7/06
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;李曉峰

1.赤霉素在防控梨葉片異常脫落中的應用。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，對梨樹枝條外源噴施赤霉素溶液。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述赤霉素溶液的濃度為0.5～1.0mg/L；優選為1.0mg/L。

4.一種防控梨葉片異常脫落的方法，其特征在于，對梨樹枝條外源噴施赤霉素溶液。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述赤霉素溶液的濃度為0.5～1.0mg/L；優選為1.0mg/L。

6.一種篩選防控梨葉片異常脫落的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)測定梨葉柄離區中的赤霉素含量：取梨葉柄離區，液氮速凍，放置于-80℃超低溫冰箱保存，用于測定葉柄離區中的赤霉素含量；

(2)外源噴施赤霉素與其他植物生長調節劑，觀察赤霉素與其他植物生長調節劑對梨落葉情況的影響；

(3)外源噴施不同濃度赤霉素處理，測定葉柄離區的生理變化，確定最佳赤霉素處理濃度。

7.根據權利要求1所述的篩選防控梨葉片異常脫落的方法，其特征在于，步驟(1)中測定葉柄離區中的赤霉素含量的過程為：

選材：在采樣地點的正常生長區與早期落葉嚴重區隨機挑選3株果樹，每株果樹選取3支帶有葉片的果枝整枝采下放于采集樣品袋中，為了消除生理影響，選擇生長相似的枝條帶回實驗室進行仔細徹底的清洗；

取樣：使用潔凈的刀片從枝條樣本中手工解剖葉柄離區組織，其中包含離區細胞及鄰近的細胞，置于液氮中，保存于-80℃冰箱；

測定：50mg的葉柄離區樣品在液氮中研磨成粉末后，同時加入0.5mL體積比為80:20的甲醇/水提取液并在4℃下避光提取12h，10,000g，20min，4℃離心后，收集上清液，將所得到的粗提液經過HiCapt-C18/SAX固相萃取柱串聯的裝置，以除去色素和酯類雜質，HiCapt-C18/SAX串聯的固相萃取小柱需先預處理，清洗與活化；上樣后，取下上端的HiCapt-C18固相萃取柱，采用2mL體積比為80:20的甲醇/水對SAX萃取小柱進行清洗，再用3mL體積比為99:1的乙腈/甲酸對SAX萃取小柱上保留的目標酸性植物激素進行解吸；解吸液在40℃下恒定氮氣流吹干，并用100μL水重新溶解；在所得到的100μL溶液中加入10μL甲酸，使得酸性植物激素呈分子狀態；然后用乙醚進行萃取；將2次萃取的有機相進行合并后在室溫下氮氣吹干，并重新溶解于100μL乙腈中；在所得到的乙腈溶液中加入10μL×20μmol/mL三乙胺和10μL×20μmol/mL 3-溴代丙烯酰基三甲基溴化銨，在室溫下渦旋35min后氮氣吹干，然后用200μL體積比為90：10的水/乙腈重新溶解，以供隨后的UPLC-MS/MS分析。

8.根據權利要求1所述的防控梨早期落葉的方法，其特征在于，步驟(2)中所述赤霉素與其他植物生長調節劑的處理濃度為：赤霉素0.5mg/L和1.0mg/L；乙烯利0.04％和0.08％；脫落酸0.3mg/L和1.0mg/L；生長素0.3mg/L和0.6mg/L，以清水為對照。

9.根據權利要求1所述的篩選防控梨葉片異常脫落的方法，其特征在于，步驟(2)中所述的處理方法為選取長勢一致、同一品種的梨樹做好標記，噴施時選擇晴天上午，將植物生長調節劑在葉片正面與反面以及與葉柄連接處噴灑均勻；各濃度的試劑重復三次，每6～8天噴施一次。處理前統計每個枝條的葉片數，以便之后進行葉片保留率的統計，每隔6～8天統計一次葉片數；葉片保留率＝目前葉片數/最初葉片總數。

10.根據權利要求1所述的篩選防控梨葉片異常脫落的方法，其特征在于，步驟(3)中噴施的赤霉素濃度為0.5mg/L和1.0mg/L，處理方法為選取生長勢一致的健壯枝條，放置于含清水的燒杯中，每4h進行赤霉素處理，噴施清水為對照，共28h；處理完成后采集枝條葉柄離區置于-80℃保存，用于測定葉柄離區的生理變化，包括活性氧相關物質含量及抗氧化酶活的測定。