[發明專利]一種新型冠狀病毒IgM/IgG抗體化學發光法檢測試劑盒

有效

• 申請號: 202010416947.6
• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN111413496B
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 劉萍;黃愛龍;欒大偉;張振斌;侯玉文;左松濤;李華;宋德才;張佳麗;汪德強;陳娟
• 申請（專利權）人: 天津博奧賽斯生物科技股份有限公司;重慶醫科大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 天津企興智財知識產權代理有限公司 12226
• 代理人: 王曉英

1.一種新型冠狀病毒IgM抗體化學發光法檢測試劑盒，其特征在于：包括抗FITC抗體包被板、FITC標記新型冠狀病毒抗原以及酶標記鼠抗人IgM單克隆抗體；其中，所述酶為堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶；FITC標記新型冠狀病毒抗原中的新型冠狀病毒抗原包括合成多肽SEQ?ID?NO：1、SEQ?ID?NO：2、SEQ?ID?NO：3、SEQ?ID?NO：4；且4種合成多肽的質量比為1:1:1:1。

2.根據權利要求1所述的新型冠狀病毒IgM抗體化學發光法檢測試劑盒，其特征在于：還包括稀釋液，當試劑盒中包括辣根過氧化物酶標記鼠抗人IgM單克隆抗體時，稀釋液包括如下組分Tris?4-8g/L；NaCl?5-20g/L；BSA?5-20g/L；CaseinNa?1-5g/L；Tween-20?0.5-5mL/L；ProClin^TM300?2-5mL/L，且pH為8.0±0.20；

當試劑盒中包括堿性磷酸酶標記鼠抗人IgM單克隆抗體時，稀釋液包括如下組分：Tris4-8g/L；ZnCl₂?1-5g/L；MgCl₂?5-20g/L；BSA?5-20g/L；ProClin^TM300?1-5mL/L，且pH為8.0±0.20。

3.根據權利要求1所述的新型冠狀病毒IgM抗體化學發光法檢測試劑盒，其特征在于：

FITC標記新型冠狀病毒抗原、辣根過氧化物酶標記鼠抗人IgM單克隆抗體、堿性磷酸酶標記鼠抗人IgM單克隆抗體的工作濃度均為0.01～0.5μg/mL。

4.根據權利要求1所述的新型冠狀病毒IgM抗體化學發光法檢測試劑盒，其特征在于：辣根過氧化物酶標記鼠抗人IgM單克隆抗體的制備方法如下，

A、辣根過氧化物酶活化：

1)配制5-10mg/mL辣根過氧化物酶溶液；

2)配制10-20mg/mL過碘酸鈉NaIO₄溶液；

3)將步驟1)和步驟2)配制溶液按體積比1：(1-2)混勻，2-8℃避光反應30min；

4)配制濃度為10-40μL/mL的乙二醇水溶液，與步驟3)配制的溶液以相同體積混合，常溫避光反應20min，活化即完成；

B、辣根過氧化物酶標記鼠抗人IgM單克隆抗體：

1)將待標記原料裝入透析袋中，用0.02-0.1M?pH?8.5-10的碳酸鹽緩沖液，透析0.5-2h；

2)將標記原料與活化的辣根過氧化物酶按質量比1:(1-3)進行混合，之后用0.02-0.1M碳酸鹽緩沖液于2-8℃透析24h，期間換液2-3次；

3)配制濃度為2-5mg/mL的NaBH₄水溶液，按1mg辣根過氧化物酶加80μL配制好的NaBH₄水溶液的比例進行混合，并于2-8℃避光反應2h；

4)將上述步驟3)完成的標記液用0.01-0.05M?PBS于2-8℃透析20-24h，加入等體積甘油，-20℃保存；

堿性磷酸酶標記鼠抗人IgM單克隆抗體的制備方法如下，

A、堿性磷酸酶活化：

1)配制5-20mg/mL堿性磷酸酶溶液；

2)配制10-20mg/mL過碘酸鈉NaIO₄溶液；

3)將上述1)和2)配制溶液按體積比1：1混勻，2-8℃避光反應30min；

4)配制濃度為10-40μL/mL的乙二醇水溶液，與上述溶液3)以相同體積混合，常溫避光反應20min，活化即完成，放-20℃保存；

B、堿性磷酸酶標記鼠抗人IgM單克隆抗體：

1)將待標記原料裝入透析袋中，用0.02-0.1M?pH9.6的碳酸鹽緩沖液，透析30min；

2)將標記原料與活化的堿性磷酸酶按質量比1:(1-3)進行混合，之后用0.02-0.1M碳酸鹽緩沖液于2-8℃透析24h，期間換液2-3次；

3)配制濃度為2-5mg/mL的NaBH₄水溶液，按1mg堿性磷酸酶加80μL配制好的NaBH₄水溶液的比例進行混合，并于2-8℃避光反應1-2h；

4)將上述步驟3)完成的標記液用0.01-0.05M?PBS于2-8℃透析20-24h，加入等體積甘油，-20℃保存。