[發明專利]一種多重納米-熒光定量超敏規模化檢測試劑盒有效
| 申請號： | 202010416762.5 | 申請日： | 2020-05-15 |
| 公開（公告）號： | CN111471799B | 公開（公告）日： | 2023-08-22 |
| 發明（設計）人： | 黃勇;童德文;羅樂 | 申請（專利權）人： | 西北農林科技大學 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222 | 代理人： | 李高峽;張娟 |
| 地址： | 712100*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 多重 納米 熒光 定量 規模化 檢測 試劑盒 | ||
1.一種檢測豬藍耳病病毒、豬瘟病毒、豬圓環病毒2型、豬偽狂犬病病毒和豬細小病毒的納米-熒光定量超敏規模化檢測試劑盒，其特征在于：
所述試劑盒包括富集探針、放大標簽、檢測探針、檢測引物，均為核酸片段，其中：
富集探針序列如SEQ?ID?NO:1、5、9、13、17所示；
放大標簽序列如SEQ?ID?NO:2、6、10、14、18所示；
檢測探針序列如SEQ?ID?NO:3、7、11、15、19所示，檢測探針兩端分別連接熒光基團和熒光淬滅基團；檢測探針的5’端熒光基團為FAM，3’端的淬滅基團為MGB；
檢測引物包括上游引物和下游引物，其中上游引物序列如SEQ?ID?NO:21所示，下游引物如SEQ?ID?NO:4、8、12、16、20所示；
所述富集探針被偶聯于磁珠上；放大標簽則被偶聯于金納米顆粒；
所述試劑盒還包括陽性對照核酸，序列如SEQ?ID?NO:22～26所示。
2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括病毒裂解液。
3.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述病毒裂解液組成為：15mM?Tris-HCl，1mM?EDTA，10mM?NaCl。
4.如權利要求1～3任一所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括PL核酸雜交緩沖液濃縮液，所述PL核酸雜交緩沖液濃縮液的組成為：0.75M?NaCl，0.075M檸檬酸鈉，0.1％Tween-20和2％SDS。
5.如權利要求1～3任一所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括Taqman探針法熒光定量PCR反應液。
6.如權利要求1～3任一所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括wash緩沖液濃縮液，所述wash緩沖液濃縮液是1M?PBS。
7.如權利要求1～3任一所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括洗脫試劑濃縮液，所述洗脫試劑濃縮液組成為：5mol/L?DTT，10mM?Tris-HCl，1mM?EDTA，pH?7.5。
8.如SEQ?ID?NO?.1～21所示的核酸在制備檢測豬藍耳病病毒、豬瘟病毒、豬圓環病毒2型、豬偽狂犬病病毒和豬細小病毒的試劑盒中的用途，其特征在于：
所述試劑盒包括：富集探針、放大標簽、檢測探針、檢測引物；
富集探針序列如SEQ?ID?NO:1、5、9、13、17所示；
放大標簽序列如SEQ?ID?NO:2、6、10、14、18所示；
檢測探針序列如SEQ?ID?NO:3、7、11、15、19所示，檢測探針兩端分別連接熒光基團和熒光淬滅基團；檢測探針的5’端熒光基團為FAM，3’端的淬滅基團為MGB；
檢測引物包括上游引物和下游引物，其中上游引物序列如SEQ?ID?NO:21所示，下游引物如SEQ?ID?NO:4、8、12、16、20所示；
所述富集探針被偶聯于磁珠上；放大標簽則被偶聯于金納米顆粒；
所述試劑盒還包括陽性對照核酸，序列如SEQ?ID?NO:22～26所示。
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