[發明專利]反義RNA ch-MYC-AS1表達檢測的引物及試劑盒

有效

• 申請號: 202010415742.6
• 申請日: 2020-05-16
• 公開（公告）號: CN111394435B
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: 胡序明;崔恒宓;陳緒靖
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 揚州蘇中專利事務所(普通合伙) 32222
• 代理人: 許必元

本發明涉及一種反義RNA ch?MYC?AS1表達檢測的引物及試劑盒，屬于分子生物學領域。所述引物包括鏈特異性RT引物和熒光定量PCR檢測引物；其中鏈特異性RT引物的序列如SEQ ID NO.8所示；熒光定量PCR檢測引物的序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。本研究發明還提供了ch?MYC?AS1表達檢測試劑盒，為ch?MYC?AS1表達規律分析提供了方法和基礎。

技術領域

本發明涉及一種原癌基因c-myc衍生的反義RNA ch-MYC-AS1表達檢測的引物及試劑盒，屬于病毒學、表觀遺傳學、腫瘤學和新型抗腫瘤和病毒藥物研究領域。

背景技術

原癌基因c-myc最先被鑒定為禽白血病病毒誘導淋巴瘤的常見整合位點，并在腫瘤發生中扮演著關鍵角色。在禽白血病病毒易感品系雞中，由于“強”病毒啟動子的插入，前病毒整合入c-myc原癌基因后由病毒啟動子LTR驅動c-myc基因高表達從而誘發法氏囊淋巴瘤。禽白血病病毒感染引起的致癌蛋白MYC的異常高表達影響了雞法氏囊組織的基因表達譜，這是導致淋巴瘤發生的重要原因。而在禽白血病病毒抗性品系雞中，機體通過減少病毒啟動子LTR驅動的c-myc基因高表達，從而對前病毒整合入c-myc原癌基因后誘導的淋巴瘤產生了抗性。因此，通過降低致癌蛋白MYC表達是一種抵抗禽白血病病毒誘導淋巴瘤發生的有效策略。

對反義RNA的研究中，我們意外發現不僅抑癌基因存在反義RNA，許多癌基因也存在反義RNA。在癌細胞中，這些反義RNA處于沉默(Silencing)狀態，DNA甲基化抑制劑AZA可明顯激活這些反義RNA表達，且反義RNA與對應的正義癌基因呈顯著負相關關系。因此，癌細胞中的一些癌基因可能受其反義RNA的調控，這些癌基因的激活可能歸因于它們反義RNA的表觀遺傳沉默，致使癌基因去抑制，從而導致癌基因的激活。這種全新的癌基因的致癌表觀遺傳學機制，不僅對基礎研究和臨床醫學研究均具重大意義，也對抗腫瘤病毒研究具有重要意義。癌基因衍生的反義RNA在抑制腫瘤細胞和腫瘤病毒增殖中的作用及其表觀遺傳學機制將逐漸被闡明，有望成為新型的抗腫瘤和病毒藥物。

發明內容

本發明通過雙鏈RNA文庫測序在雞2號染色體上鑒定出一條原癌基因c-myc衍生的反義RNA，命名為ch-MYC-AS1。研究表明，ch-MYC-AS1可以抑制原癌基因c-myc表達并抑制J亞群禽白血病病毒增殖。因此，進一步了解ch-MYC-AS1在不同組織細胞的表達規律顯得尤為重要。本發明的目的是提供一種能檢測ch-MYC-AS1表達的檢測引物及試劑盒。

本發明的目的是這樣實現的，一種反義RNA ch-MYC-AS1表達檢測的引物，其特征在于，包括鏈特異性RT引物和熒光定量PCR檢測引物；所述鏈特異性RT引物的序列如SEQ IDNO.8所示；所述熒光定量PCR檢測引物的序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示；其中：

SEQ ID NO.8為：5’-CAGAGGAGAACGACAAGAGGCGAAC-3’；

SEQ ID NO.9為：5’-CACAGACTAATCGCAGAGA-3’；

SEQ ID NO.10為：5’-GTGATGTCCAAGAGTTCCTA-3’。

一種反義RNAch-MYC-AS1表達檢測試劑盒，包括鏈特異性RT引物、逆轉錄試劑、熒光定量PCR檢測引物和定量PCR檢測試劑；其特征在于，

所述鏈特異性RT引物的序列如SEQ ID NO.8所示；所述熒光定量PCR檢測引物的序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示；其中：

SEQ ID NO.8為：5’-CAGAGGAGAACGACAAGAGGCGAAC-3’；

SEQ ID NO.9為：5’-CACAGACTAATCGCAGAGA-3’；