[發(fā)明專利]用于識(shí)別G-四鏈體的多肽探針及其在檢測(cè)細(xì)胞中G-四鏈體的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010413944.7
• 申請(qǐng)日: 2020-05-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111647052B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 譚錚;鄭克威;鄭金平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院
• 主分類號(hào): C07K14/00
• 分類號(hào): C07K14/00;C12Q1/6869
• 代理公司: 深圳市迪斯卓越專利代理事務(wù)所(普通合伙) 44443
• 代理人: 閔華明;李小艷

本發(fā)明公開(kāi)了一種用于識(shí)別G?四鏈體的多肽探針及其在檢測(cè)細(xì)胞中G?四鏈體的應(yīng)用。其中，用于識(shí)別G?四鏈體的多肽探針包括2～4個(gè)G?四鏈體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和用于連接相鄰所述G?四鏈體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的連接肽，所述G?四鏈體結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)特異性結(jié)構(gòu)區(qū)，所述特異性結(jié)構(gòu)區(qū)的氨基酸序列為PGHLKGREIGMWY(SEQ?ID?NO.1)。本發(fā)明提供的多肽探針特異性強(qiáng)，同時(shí)與細(xì)胞內(nèi)的還原環(huán)境不存在不相容的問(wèn)題，可以應(yīng)用于檢測(cè)細(xì)胞中G?四鏈體。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物探針技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于識(shí)別G-四鏈體的多肽探?針及其在檢測(cè)細(xì)胞中G-四鏈體的應(yīng)用。

背景技術(shù)

G-四鏈體是由富含鳥(niǎo)嘌呤的核酸形成的四鏈高級(jí)結(jié)構(gòu)。潛在的G-四鏈體形?成序列(PQS)在高等動(dòng)物細(xì)胞的基因組中的含量極其豐富，基因組中G-四鏈?體的檢測(cè)和定量對(duì)研究G-四鏈體的生物學(xué)功能非常重要。盡管體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)G-?四鏈體易于在單鏈核酸中形成，但細(xì)胞中的環(huán)境卻更復(fù)雜。比如：染色體中的?富含鳥(niǎo)嘌呤的序列受限于長(zhǎng)雙鏈DNA，而且兩條互補(bǔ)DNA鏈彼此配對(duì)結(jié)合。?此外，細(xì)胞核中DNA被大量的蛋白質(zhì)結(jié)合并壓縮。這些情況都不利于G-四鏈?體的形成。最近研究發(fā)現(xiàn)，使用G-四鏈體抗體的免疫熒光或免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)可?以在化學(xué)固定的人細(xì)胞中檢測(cè)到G-四鏈體。然而，由于常規(guī)的固定劑例如甲醛，?乙醇和乙酸等可能會(huì)讓核酸變性，細(xì)胞的固定，透化或染色過(guò)程有可能導(dǎo)致G-?四鏈體生成。因此，G-四鏈體是否能在細(xì)胞中形成依然存在爭(zhēng)議，許多生物學(xué)?家仍然不完全相信它們的存在。

G-四鏈體的抗體是一種有效識(shí)別靶標(biāo)的探針，卻不適合在細(xì)胞中檢測(cè)G-四?鏈體，因?yàn)榧?xì)胞內(nèi)的還原環(huán)境與維持抗體空間結(jié)構(gòu)所需的二硫鍵不相容。在細(xì)?胞中抗體極易受損，導(dǎo)致其僅在由長(zhǎng)簇鳥(niǎo)嘌呤序列組成的端粒DNA中檢測(cè)到?G-四鏈體。天然的G-四鏈體結(jié)合蛋白也不適合檢測(cè)G-四鏈體，因?yàn)樗鼈兺ǔ＞?有多個(gè)功能結(jié)構(gòu)域，可以與靶標(biāo)之外的其他蛋白質(zhì)發(fā)生相互作用。它們有可能?因?yàn)榕c其他蛋白的相互作用被定位到DNA或RNA上，導(dǎo)致非特異性識(shí)別。因?此，我們需要更合適的蛋白探針來(lái)檢測(cè)和定量G-四鏈體，并探索它們?cè)诩?xì)胞中?的功能。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的之一在于提供一種用于識(shí)別G-四?鏈體的多肽探針，其解決現(xiàn)有探針無(wú)法應(yīng)用于檢測(cè)細(xì)胞中G-四鏈體的技術(shù)問(wèn)題。

本發(fā)明的目的之二在于提供上述多肽探針在檢測(cè)細(xì)胞中G-四鏈體的應(yīng)用，?解決現(xiàn)有技術(shù)無(wú)法檢測(cè)細(xì)胞中G-四鏈體的問(wèn)題。

本發(fā)明的目的之一采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種用于識(shí)別G-四鏈體的多肽?探針，包括2～4個(gè)G-四鏈體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和用于連接相鄰所述G-四鏈體結(jié)合結(jié)?構(gòu)域的連接肽，所述G-四鏈體結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括一個(gè)特異性結(jié)構(gòu)區(qū)，所述特異性?結(jié)構(gòu)區(qū)的氨基酸序列為PGHLKGREIGMWY(SEQ?ID?NO.1)。

優(yōu)選地，所述G-四鏈體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的氨基酸數(shù)目為23個(gè)。

優(yōu)選地，所述G-四鏈體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列為?HPGHLKGREIGMWYAKKQGQKNK(SEQ?ID?NO.2)。

優(yōu)選地，所述G-四鏈體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的數(shù)量為2個(gè)。

優(yōu)選地，所述連接肽包括2～4個(gè)六肽，所述六肽的序列為GTGSGA。

優(yōu)選地，所述六肽的數(shù)量為3個(gè)。

優(yōu)選地，所述多肽探針還包括位于所述多肽探針C端的蛋白標(biāo)簽。

本發(fā)明的目的之二采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種多肽探針在檢測(cè)細(xì)胞中G-?四鏈體的應(yīng)用。

優(yōu)選地，采用染色質(zhì)免疫沉淀-二代測(cè)序方法檢測(cè)細(xì)胞中的G-四鏈體。

優(yōu)選地，細(xì)胞來(lái)自于人類、小鼠或雞。