[發明專利]一種抑制NK細胞KIR 2DL1受體表達的siRNA及其應用

在審

• 申請號: 202010413246.7
• 申請日: 2020-05-15
• 公開（公告）號: CN111778245A
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發明（設計）人: 劉廣賢
• 申請（專利權）人: 劉廣賢
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/861;C12N15/88;A61K31/713;A61P31/12;A61P35/00
• 代理公司: 北京知呱呱知識產權代理有限公司 11577
• 代理人: 張偉洋

本發明實施例公開了一種抑制NK細胞KIR 2DL1受體表達的siRNA及其應用，屬于生物技術領域。所述siRNA序列為2DL1?1或/和2DL1?2，其中，2DL1?1的正義鏈如SEQ ID NO.1所示，反義鏈如SEQ ID NO.2所示；2DL1?2的正義鏈如SEQ ID NO.3所示，反義鏈如SEQ ID NO.4所示。本發明的siRNA能明顯特異性抑制KIR 2DL1受體表達，可使NK細胞激活，殺傷活性顯著增強，能夠有效應用于抗病毒和抗腫瘤的防治中。

技術領域

本發明實施例涉及生物技術領域，具體涉及一種通過抑制NK細胞KIR 2DL1受體表達的siRNA技術及其應用。

背景技術

干細胞和免疫細胞是現代醫學最熱點的前沿技術領域，可以說，現代醫學的重大疾病、常見疾病、慢性疾病、衰老與退化性疾病的治療，沒有這兩個細胞的參與，將很難有飛躍性的進步。其中免疫細胞是人體免疫學的功能主體，在免疫系統中發揮支柱的作用。自然殺傷細胞(NK細胞)是細胞免疫的重要成員，也是先天免疫的重要組成部分，由于其發揮先天免疫、基礎免疫、免疫調節的重要作用，而且在發揮作用時不需要預先活化，所以，在人體免疫系統功能發揮中占有重要一席，在免疫學領域臨床應用中得到業界的高度重視。

近年來，NK細胞受到業界的高度重視，在癌癥預防、腫瘤免疫治療、健康管理和抗衰老等方面應用得到青睞。NK細胞發揮先天免疫、基礎免疫的重要作用；而且在發揮作用時不需要預先活化，能在病原侵入人體的第一時間及時消滅和清除病原，避免引起疾病；也能在體內不需要預警、指示、動員等過程而直接殺死變異、癌變、衰老退化的細胞，是人體前沿防御、維持內環境穩定、免疫系統協同作戰的重要組成部分。由于NK細胞的上述功能角色和作用特點，其能發揮很好的便捷、廣譜、非特異作用，但隨之出現的缺陷是非特異性、針對性作用相對較弱，尤其是在病毒性疾病、惡性疾病等治療中，時常表現出作用力不足、療效不確定等問題。

殺傷免疫球蛋白樣受體(killer immunoglobulin-like receptors，KIR)是免疫球蛋白樣超家族的成員，是NK細胞上的抑制性調節通路，可抑制NK活化和裂解活性。KIR受體是一個家族，有18個成員，分別是KIR 1D、KIR 2DL1-5、 KIR 2DS1-5、KIR 3DL1-3、KIR3DS1、假基因xv、x和KIR 2DP1。依據目前國際KIR基因命名方法，KIR基因中的D代表其胞外結構中的Ig樣結構，2D、 3D代表胞外有2個或3個Ig樣結構，L和S代表胞內尾段的長短，置于命名的末尾，后面的數字表示各個不同的成員。研究表明，通過調節KIR受體通路活性，可以提高NK細胞殺傷功能。

現有技術記載KIR受體封閉策略，主要通過抗體技術實現，具有操作方便、封閉效果好的優點。但細胞與抗體的鉸鏈，造成這種策略的應用中容易出現以下缺陷：(1)攜帶抗體的NK細胞反復輸注有一定的免疫副作用，產生異常免疫反應或發熱等；(2)鉸鏈抗體的NK細胞已經失去了其自然的特點，進入體內很容易被人體免疫識別為病態細胞而被殺死，或也會誘導身體異常免疫反應。

RNA干擾(RNA interference，RNAi)是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA(double-stranded RNA，dsRNA)誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。由于使用RNAi技術可以特異性剔除或關閉特定基因的表達，并且副作用會很弱，所以該技術已被廣泛用于探索基因功能和傳染性疾病及惡性腫瘤的治療領域。

目前，通過KIR受體RNA干擾的技術活化NK細胞的專利只涉及到KIR 3DL1的活化，主要用于抗艾滋病的研究中。研究表明，KIR 2DL1基因表達頻率在中國人是82.6％，覆蓋了大多數個體，KIR 2DL2基因表達頻率是47.8％， KIR 2DL3基因表達頻率是63.0％，三個基因表達可以覆蓋所有中國人，可以通過檢測三種KIR受體表達與否和表達強度，選擇其中一種KIR基因進行干擾沉默。因此，本研發團隊對上述三個基因沉默技術進行研究，以開展針對三個基因分別調控的研究領域應用。

發明內容