[發明專利]一種兔出血癥病毒桿狀病毒載體疫苗及其制備方法

在審

• 申請號: 202010412496.9
• 申請日: 2020-05-15
• 公開（公告）號: CN111643659A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發明（設計）人: 袁朗;范志宇
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/12;A61P31/14;C12N15/866;C12N7/01;C12R1/93
• 代理公司: 蕪湖眾匯知識產權代理事務所(普通合伙) 34128
• 代理人: 曹宏筠

1.一種兔出血癥病毒桿狀病毒載體疫苗，包括：抗原和佐劑，其特征在于：所述的抗原為重組兔出血癥桿狀病毒VP60蛋白，所述疫苗用于預防兔病毒性出血癥。

2.根據權利要求1所述一種兔出血癥病毒桿狀病毒載體疫苗，其特征在于：所述兔出血癥病毒桿狀病毒載體為重組兔出血癥病毒VP60桿狀病毒BAC-VP60株，保藏編號為：CCTCC V201833。

3.根據權利要求1所述一種兔出血癥病毒桿狀病毒載體疫苗，其特征在于：所述疫苗是由重組兔出血癥桿狀病毒VP60蛋白滅活后制備獲得，抗原按每毫升疫苗中含滅活前的VP60蛋白血凝效價不低于1:256的標準進行配苗。

4.根據權利要求1所述一種兔出血癥病毒桿狀病毒載體疫苗，其特征在于：所述疫苗內含有佐劑，且佐劑為氫氧化鋁膠，所述佐劑與抗原的比例為1：9。

5.根據權利要求1所述一種兔出血癥病毒桿狀病毒載體疫苗的制備方法，其特征在于：所述制備方法包括以下步驟：

步驟1：兔病毒性出血癥生產用毒種制備：將毒種稀釋后接種健康易感染的家兔，無菌采集接種后24 ~ 72h瀕死或剛死亡的且具有典型病理變化的肝臟組織經檢驗合格后，保存作為生產用毒種備用；

步驟2：兔出血癥病毒桿狀病毒載體細胞培養物滅活液的制備：取生產用毒種進行細胞接種，無菌條件下稱量采毒的肝臟組織，加適量的pH7.2磷酸鹽緩沖液或生理鹽水進行搗碎或研磨、過濾后得組織懸液，按組織懸液總量的0.1%~0.5%加入甲醛溶液，充分混合后裝入無菌容器中，密封后置37°C環境下滅活48h,得到兔出血癥病毒桿狀病毒載體細胞培養物滅活液，并進行滅活檢驗、血凝價檢驗及病毒含量測定；

步驟3：兔出血癥病毒桿狀病毒載體疫苗的配制：抗原含量按每毫升疫苗中含滅活前的VP60蛋白血凝效價不低于1:256的標準進行配苗，先將佐劑加入配苗乳化罐內，然后加入兔出血癥病毒桿狀病毒載體細胞培養物滅活液，1500~3000rpm攪拌5-10min，使其充分混合乳化，既得兔出血癥病毒桿狀病毒載體疫苗。

6.根據權利要求5所述一種兔出血癥病毒桿狀病毒載體疫苗的制備方法，其特征在于：所述步驟2中的接種細胞為Sf9細胞，所用培養基為昆蟲細胞培養基，重組兔出血癥病毒VP60桿狀病毒接種量為培養基總量的1%，培養條件為溫度27～28°C、pH值為6.0～6.2、溶氧(DO)50%～60%、攪拌轉速50～70r/min；當病變細胞達85%以上即可收獲細胞培養物。

7.根據權利要求5所述一種兔出血癥病毒桿狀病毒載體疫苗的制備方法，其特征在于：所述步驟2獲得兔出血癥病毒桿狀病毒載體細胞培養物滅活液之后，需進行血凝效價測定，細胞培養物對1%人“O”型紅細胞凝集效價應不低于1:512。

8.根據權利要求5所述一種兔出血癥病毒桿狀病毒載體疫苗的制備方法，其特征在于：所述步驟2中，使用甲醛溶液對收獲的細胞培養物進行滅活處理；并對滅活后的兔出血癥病毒桿狀病毒載體細胞培養物滅活液進行滅活檢驗：滅活液接種細胞后無細胞病變，紅細胞凝集效價測定無血凝性。