[發(fā)明專利]一種梨幼胚培養(yǎng)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010410106.4
• 申請(qǐng)日: 2020-05-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111699970A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳巨友;湯超;王鵬;張紹鈴;齊開(kāi)杰;謝智華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;李曉峰

1.一種梨幼胚培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)外植體消毒處理：選取授粉后5-6周的未成熟梨果實(shí)，采摘后先在低溫條件下進(jìn)行春化處理3-5d，將春化處理后的果實(shí)用水沖洗后剝?nèi)スぁ⒐猓@得未成熟幼胚或帶有種皮的成熟幼胚，再將未成熟幼胚或帶有種皮的成熟幼胚用水充分清洗后吸干表面水分；在超凈工作臺(tái)上，以70％-75％乙醇浸泡未成熟幼胚或帶有種皮的成熟幼胚10-30s，再用無(wú)菌水清洗，然后使用3.3％次氯酸鈉溶液消毒4-6min，再用無(wú)菌水清洗后吸干未成熟幼胚或帶有種皮的成熟幼胚表面水分后備用；

(2)幼胚培養(yǎng)：將步驟(1)處理后的帶有種皮的成熟幼胚用已滅菌的鑷子和解剖刀剖開(kāi)種皮取出成熟幼胚，將未成熟幼胚或成熟幼胚接種于幼胚培養(yǎng)基上，進(jìn)行幼胚培養(yǎng)；接種后置于每天光照10-14h，光照強(qiáng)度為800-1000μmolm^-2s^-1，相對(duì)濕度為70％-75％，培養(yǎng)溫度為22-28℃的條件下培養(yǎng)至幼胚萌發(fā)，繼續(xù)培養(yǎng)獲得長(zhǎng)出2-3對(duì)真葉的幼苗；

(3)生根培養(yǎng)：將步驟(2)所獲得的長(zhǎng)出2-3對(duì)真葉的幼苗在根頸以下0.6-1.2cm處剪斷主根后接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行促根培養(yǎng)，接種后先在25-28℃條件下全暗培養(yǎng)1-3d，然后置于每天光照12-14h，光照強(qiáng)度為800-1000μmolm^-2s^-1，相對(duì)濕度為70％-75％，培養(yǎng)溫度為22-28℃的條件下培養(yǎng)至生根；

(4)煉苗移栽：待幼苗長(zhǎng)至3-5cm高后置于自然光照下煉苗5-7d，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽至草炭土基質(zhì)中，覆膜，并向基質(zhì)和葉片施用1/4MS大量元素營(yíng)養(yǎng)液，保持濕度，7d后逐漸撤去覆膜，并逐步減少營(yíng)養(yǎng)液施用次數(shù)，待幼苗成活后再移栽大田。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的梨幼胚培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(2)所述的幼胚培養(yǎng)基為：MS+1.8-2.0mg/L 6-BA+0.1-0.2mg/L IBA+0.5％-0.7％瓊脂，pH值為5.6-5.9。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的梨幼胚培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(3)所述的生根培養(yǎng)基為：1/2MS+0.4-0.5mg/L IBA+0.5％-0.7％瓊脂，pH值為5.6-5.9。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的梨幼胚培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟(1)中所述的低溫條件為1-7℃條件。