[發明專利]建立替米考星對豬胞內勞森菌的PK-PD同步模型的方法

在審

• 申請號: 202010409968.5
• 申請日: 2020-05-15
• 公開（公告）號: CN111549156A
• 公開（公告）日: 2020-08-18
• 發明（設計）人: 謝書宇;羅萬和;陳冬梅;潘源虎;瞿瑋
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 張煥響

本發明公開了建立替米考星對豬胞內勞森菌的PK?PD同步模型的方法，包括：繪制豬胞內勞森菌在IPEC?J2細胞中的生長曲線；測定替米考星對豬胞內勞森菌胞內和胞外最低抑菌濃度、防突變濃度及抗菌后效應，繪制體外和半體內胞內殺菌曲線；根據所測的豬胞內勞森菌半體內胞內殺菌曲線，選擇合適的PK?PD參數，擬合數據，建立替米考星對豬胞內勞森菌的PK?PD同步模型，制定合理的給藥方案。本發明可制定替米考星對豬胞內勞森菌的給藥方案，為科學養殖提供穩定的用藥數據支持，科學指導臨床用藥；有效緩解豬胞內勞森菌對替米考星的耐藥性產生，保護和維持替米考星的有效性，并為抗菌藥物對胞內菌的PK?PD同步模型的研究提供指南。

技術領域

本發明涉及PK-PD同步模型技術領域，特別是涉及一種建立替米考星對豬胞內勞森菌的PK-PD同步模型的方法。

背景技術

胞內勞森菌(Lawsonia Intracellularis，L.intracellularis)屬于脫硫弧菌屬，革蘭氏陰性菌，呈弧形彎曲狀、逗點狀或S形，大小為1.25～1.75μm×0.25～0.43μm，專性寄生于動物腸道細胞中，可引起以回腸和結腸隱窩內未成熟的腸細胞腺瘤樣增生為特征的豬增生性腸炎(PPE)。雖PPE死亡率不高，但該病可引起病豬腹瀉、生長緩慢等臨床癥狀，嚴重降低動物的飼料利用率，進而造成巨大的經濟損失。

隨著豬增生性腸炎對抗生素的耐藥日益嚴重，越來越多的藥物已經不能用于臨床上對豬增生性腸炎的治療，因此通過嚴謹的科學手段控制和減緩耐藥性的產生和傳播任重道遠。替米考星作為新型大環內酯類抗生素，對細胞膜有很強的滲透性，能較快透過細胞膜達到胞內，具有良好的腸細胞內蓄積能力。此外胞內勞森菌的體外抑菌試驗結果表明，替米考星對胞內勞森菌具有比其他抗菌藥物更強的抗菌活性。因此，替米考星可作為目前臨床胞內勞森菌感染的首選藥物。為了科學有效使用替米考星在豬增生性腸炎治療上的應用、減緩其耐藥性的產生，以及幫助我國獸醫工作者在臨床過程中有規可依，合理給藥方案的制定對于解決現有技術中藥物使用不足之處具有重要意義。

發明內容

本發明的目的是提供建立替米考星對豬胞內勞森菌的PK-PD同步模型的方法，通過測定替米考星對豬胞內勞森菌的藥效學和在豬體內的藥動學參數，制定出替米考星對豬胞內勞森菌的合理給藥方案，為科學養殖提供穩定的用藥數據支持，能更科學的進行指導臨床用藥，以及有效治療豬增生性腸炎并對臨床用藥提供參考；能夠在一定程度上有效緩解豬胞內勞森菌對替米考星的耐藥性產生，保護和維持替米考星的有效性；能夠為藥物對胞內菌的PK-PD同步模型的研究提供指南。

為實現上述目的，本發明提供了如下方案：

本發明提供了建立替米考星對豬胞內勞森菌的PK-PD同步模型的方法，包括以下步驟：

步驟1：測定替米考星對豬胞內勞森菌的藥效學和在豬體內的藥動學參數：采用熒光定量PCR法計數，繪制豬胞內勞森菌在豬空腸上皮細胞IPEC-J2中的生長曲線。具體過程為：將豬空腸上皮細胞鋪于24孔板中，待細胞匯合度為60％左右時，加入胞內勞森菌(濃度為5×10⁵L.intracellularis/mL)，培養3h后，去除上清液，用PBS清洗3次，此時記為0h，更換新鮮細胞培養基，分別在0、6、12、18、24h和2、3、4、5、6、7、8d取樣，用熒光定量PCR測定細菌的含量，繪制出胞內勞森菌的生長曲線。