[發明專利]一種RBP4作為肌少癥治療靶點的檢測方法

在審

• 申請號: 202010409002.1
• 申請日: 2020-05-14
• 公開（公告）號: CN111748615A
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 高偉;魯翔;王麗;趙璨;張康振;王玥
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學附屬逸夫醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;G01N33/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 楊敬

本發明公開一種RBP4作為肌少癥治療靶點的檢測方法，檢測包括RBP4在肌少癥患者的腓腸肌組織中表達變化，腺病毒沉默小鼠骨骼肌RBP4表達后小鼠運動耐量的改變，和RBP4在小鼠C2C12成肌細胞分化過程的表達變化。本發明檢測方法通過肌少癥患者腓腸肌組織中提取蛋白樣品檢測RBP4的表達水平；利用腺病毒沉默小鼠腓腸肌RBP4基因表達，測量小鼠運動耐量；以及從分化不同程度的C2C12成肌細胞中提取RNA檢測RBP4的表達。操作簡單、快速、穩定性好；為肌少癥患者的臨床診治提供強有力的理論支持，具有臨床意義和推廣價值。

技術領域

本發明涉及一種檢測方法，具體是一種RBP4作為肌少癥治療靶點的檢測方法。

背景技術

骨骼肌是人體最有活力和可塑性的組織之一，約占總體重的40％，并包含所有身體蛋白質的50-75％。骨骼肌萎縮發生于多種情況下，比如疾病狀態(心力衰竭、癌癥、糖尿病、敗血癥等)、去神經性損害、禁食、老年化和藥物治療等。骨骼肌萎縮主要是由于肌肉蛋白質過度分解所致，而蛋白質分解通常伴隨蛋白質合成減少，表現為骨骼肌質量下降和功能障礙，從而導致患者生活質量下降，引起發病率和死亡率增加。因此，尋找新的有效的肌肉因子作為肌肉萎縮治療的干預靶點具有重要意義。

視黃醇結合蛋白4(RBP4)，是循環血液中視黃醇(維生素A醇)的轉運蛋白，它主要在肝臟中合成釋放到外循環，小部分來自于脂肪細胞。近年來研究表明RBP4通過炎癥途徑誘導胰島素抵抗和心血管疾病，參與體內多器官的代謝調節。最近我們發現，RBP4在肌少癥患者的腓腸肌組織中表達下降；腺病毒沉默小鼠肌肉組織中RBP4表達后，小鼠的運動耐量降低；進一步研究發現RBP4表達水平隨小鼠C2C12成肌細胞分化而逐漸升高。

發明內容

本發明的目的在于提供一種RBP4作為肌少癥治療靶點的檢測方法，通過肌少癥患者腓腸肌組織中提取蛋白樣品檢測RBP4的表達水平；利用腺病毒沉默小鼠腓腸肌RBP4基因表達，測量小鼠運動耐量；以及從分化不同程度的C2C12成肌細胞中提取RNA檢測RBP4的表達。操作簡單、快速、穩定性好；為肌少癥患者的臨床診治提供強有力的理論支持，具有臨床意義和推廣價值。

本發明的目的可以通過以下技術方案實現：

一種RBP4作為肌少癥治療靶點的檢測方法，檢測包括RBP4在肌少癥患者的腓腸肌組織中表達變化，腺病毒沉默小鼠骨骼肌RBP4表達后小鼠運動耐量的改變，和RBP4在小鼠C2C12成肌細胞分化過程的表達變化。

進一步的，所述RBP4在肌少癥患者的腓腸肌組織中表達變化包括WesternBlot檢測試劑。

進一步的，所述WesternBlot檢測試劑包括RBP4特異性抗體和內參照GAPDH特異性抗體。

進一步的，所述RBP4特異性抗體為：ab10919。

進一步的，其特征在于，所述內參照GAPDH特異性抗體為60004-1-Ig。

進一步的，所述腺病毒沉默小鼠骨骼肌RBP4表達后小鼠運動耐量的改變包括小鼠運動距離和運動時間測量。

進一步的，所述腺病毒沉默小鼠骨骼肌RBP4表達包括RBP4腺病毒序列。

進一步的，所述RBP4在小鼠C2C12成肌細胞分化過程的表達變化包括實時熒光定量PCR檢測試劑。

進一步的，所述實時熒光定量PCR檢測試劑包括RBP4的特異性引物和內參照GAPDH的特異性引物。

所述RBP4的特異性引物包括RBP4的特異性引物正向引物和RBP4的特異性引物反向引物。

進一步的，所述內參照GAPDH的特異性引物包括GADH特異性引物正向引物和GAPDH特異性引物反向引物。

本發明的有益效果：