[發(fā)明專利]一種RBP4作為肌少癥治療靶點(diǎn)的檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010409002.1
• 申請(qǐng)日: 2020-05-14
• 公開（公告）號(hào): CN111748615A
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高偉;魯翔;王麗;趙璨;張康振;王玥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京醫(yī)科大學(xué)附屬逸夫醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;G01N33/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京同輝知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11357
• 代理人: 楊敬

本發(fā)明公開一種RBP4作為肌少癥治療靶點(diǎn)的檢測(cè)方法，檢測(cè)包括RBP4在肌少癥患者的腓腸肌組織中表達(dá)變化，腺病毒沉默小鼠骨骼肌RBP4表達(dá)后小鼠運(yùn)動(dòng)耐量的改變，和RBP4在小鼠C2C12成肌細(xì)胞分化過程的表達(dá)變化。本發(fā)明檢測(cè)方法通過肌少癥患者腓腸肌組織中提取蛋白樣品檢測(cè)RBP4的表達(dá)水平；利用腺病毒沉默小鼠腓腸肌RBP4基因表達(dá)，測(cè)量小鼠運(yùn)動(dòng)耐量；以及從分化不同程度的C2C12成肌細(xì)胞中提取RNA檢測(cè)RBP4的表達(dá)。操作簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定性好；為肌少癥患者的臨床診治提供強(qiáng)有力的理論支持，具有臨床意義和推廣價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)方法，具體是一種RBP4作為肌少癥治療靶點(diǎn)的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

骨骼肌是人體最有活力和可塑性的組織之一，約占總體重的40％，并包含所有身體蛋白質(zhì)的50-75％。骨骼肌萎縮發(fā)生于多種情況下，比如疾病狀態(tài)(心力衰竭、癌癥、糖尿病、敗血癥等)、去神經(jīng)性損害、禁食、老年化和藥物治療等。骨骼肌萎縮主要是由于肌肉蛋白質(zhì)過度分解所致，而蛋白質(zhì)分解通常伴隨蛋白質(zhì)合成減少，表現(xiàn)為骨骼肌質(zhì)量下降和功能障礙，從而導(dǎo)致患者生活質(zhì)量下降，引起發(fā)病率和死亡率增加。因此，尋找新的有效的肌肉因子作為肌肉萎縮治療的干預(yù)靶點(diǎn)具有重要意義。

視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP4)，是循環(huán)血液中視黃醇(維生素A醇)的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，它主要在肝臟中合成釋放到外循環(huán)，小部分來(lái)自于脂肪細(xì)胞。近年來(lái)研究表明RBP4通過炎癥途徑誘導(dǎo)胰島素抵抗和心血管疾病，參與體內(nèi)多器官的代謝調(diào)節(jié)。最近我們發(fā)現(xiàn)，RBP4在肌少癥患者的腓腸肌組織中表達(dá)下降；腺病毒沉默小鼠肌肉組織中RBP4表達(dá)后，小鼠的運(yùn)動(dòng)耐量降低；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)RBP4表達(dá)水平隨小鼠C2C12成肌細(xì)胞分化而逐漸升高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種RBP4作為肌少癥治療靶點(diǎn)的檢測(cè)方法，通過肌少癥患者腓腸肌組織中提取蛋白樣品檢測(cè)RBP4的表達(dá)水平；利用腺病毒沉默小鼠腓腸肌RBP4基因表達(dá)，測(cè)量小鼠運(yùn)動(dòng)耐量；以及從分化不同程度的C2C12成肌細(xì)胞中提取RNA檢測(cè)RBP4的表達(dá)。操作簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定性好；為肌少癥患者的臨床診治提供強(qiáng)有力的理論支持，具有臨床意義和推廣價(jià)值。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種RBP4作為肌少癥治療靶點(diǎn)的檢測(cè)方法，檢測(cè)包括RBP4在肌少癥患者的腓腸肌組織中表達(dá)變化，腺病毒沉默小鼠骨骼肌RBP4表達(dá)后小鼠運(yùn)動(dòng)耐量的改變，和RBP4在小鼠C2C12成肌細(xì)胞分化過程的表達(dá)變化。

進(jìn)一步的，所述RBP4在肌少癥患者的腓腸肌組織中表達(dá)變化包括WesternBlot檢測(cè)試劑。

進(jìn)一步的，所述WesternBlot檢測(cè)試劑包括RBP4特異性抗體和內(nèi)參照GAPDH特異性抗體。

進(jìn)一步的，所述RBP4特異性抗體為：ab10919。

進(jìn)一步的，其特征在于，所述內(nèi)參照GAPDH特異性抗體為60004-1-Ig。

進(jìn)一步的，所述腺病毒沉默小鼠骨骼肌RBP4表達(dá)后小鼠運(yùn)動(dòng)耐量的改變包括小鼠運(yùn)動(dòng)距離和運(yùn)動(dòng)時(shí)間測(cè)量。

進(jìn)一步的，所述腺病毒沉默小鼠骨骼肌RBP4表達(dá)包括RBP4腺病毒序列。

進(jìn)一步的，所述RBP4在小鼠C2C12成肌細(xì)胞分化過程的表達(dá)變化包括實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)試劑。

進(jìn)一步的，所述實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)試劑包括RBP4的特異性引物和內(nèi)參照GAPDH的特異性引物。

所述RBP4的特異性引物包括RBP4的特異性引物正向引物和RBP4的特異性引物反向引物。

進(jìn)一步的，所述內(nèi)參照GAPDH的特異性引物包括GADH特異性引物正向引物和GAPDH特異性引物反向引物。

本發(fā)明的有益效果：