[發明專利]一種基于指尖血的酶聯免疫分析方法

在審

• 申請號: 202010408723.0
• 申請日: 2020-05-14
• 公開（公告）號: CN111610333A
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發明（設計）人: 張無量
• 申請（專利權）人: 武漢康珠生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/545
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 黃冠華

本發明提供一種基于指尖血的酶聯免疫分析方法，涉及免疫檢測技術領域。該基于指尖血的酶聯免疫分析方法，包括以下操作步驟：1)將血小板單克隆抗體SZ?51與膜糖蛋白單克隆抗體SZ?21分別加入稀釋液進行稀釋，然后加入到聚苯乙烯酶標板表面，將酶標板在低溫下過夜并加入封閉液；2)使用清洗液將酶標板清洗三次，形成包被的聚苯乙烯酶標板；3)采集指尖血，將待測指尖血中加入pH值為7.4的0.2M磷酸緩沖液，配制待測指尖血標準品溶液，混合均勻后低溫保存備用。本發明，通過利用酶聯免疫分析方法對指尖血中血小板的活化程度進行測定，能夠測定血小板功能活化劑或抑制劑對血小板功能的影響，測定過程無需過多的大型設備，操作簡單，省時省力，成本低。

技術領域

本發明涉及免疫檢測技術領域，具體為一種基于指尖血的酶聯免疫分析方法。

背景技術

酶聯免疫分析法是一種利用抗原抗體之間專一性鍵結的特性對檢體進行檢測的方法。ELISA分析法由于其快速、簡便的分析特性，廣泛用于血清、血漿、尿、便、組織液等樣品中各種生化指標、疾病標志物的臨床檢驗。其中，雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的ELISA分析方法，其基本工作原理是：利用連接于固相載體上的抗體和酶標抗體分別與樣品中被檢測抗原分子上的兩個抗原決定簇結合，形成固相抗體-抗原-酶標抗體免疫復合物。由于反應系統中固相抗體和酶標抗體的量相對于待測抗原是過量的，因此復合物的形成量與待測抗原的含量在檢測范圍內成正比，測定復合物中的酶作用于加入的底物后生成的有色物質量，即可確定待測抗原含量。

目前，基于指尖血的酶聯免疫分析時需要運用到大型儀器輔助，設備較昂貴、成本高、操作復雜、費時，而且往往都需要受過專門培訓的技術人員才會使用，難以在基層醫療單位普及推廣，不適合于大眾人群對血小板的活化程度進行測定。

發明內容

(一)解決的技術問題

針對現有技術的不足，本發明提供了一種基于指尖血的酶聯免疫分析方法，解決了現有技術中存在的缺陷與不足。

(二)技術方案

為實現以上目的，本發明通過以下技術方案予以實現：一種基于指尖血的酶聯免疫分析方法，包括以下操作步驟：

1)將血小板單克隆抗體SZ-51與膜糖蛋白單克隆抗體SZ-21分別加入稀釋液進行稀釋，然后將血小板單克隆抗體SZ-51稀釋液與膜糖蛋白單克隆抗體SZ-21稀釋液加入到聚苯乙烯酶標板表面，將酶標板在低溫下過夜并加入封閉液；

2)使用清洗液將酶標板清洗三次，洗滌除去雜質，形成包被的聚苯乙烯酶標板；

3)采集指尖血，將待測指尖血中加入pH值為7.4的0.2M磷酸緩沖液，配制待測指尖血標準品溶液，混合均勻后低溫保存備用；

4)待測指尖血標準品溶液加入到包被的聚苯乙烯酶標板表面，使其與抗體鍵合，隨后用清洗液洗滌聚苯乙烯酶標板并甩干；

5)往包被的聚苯乙烯酶標板表面加入Biotin-SZ2，使其進行反應，隨后用清洗液洗滌聚苯乙烯酶標板并甩干；

6)往包被的聚苯乙烯酶標板表面加入親和素標記的辣根過氧化物酶檢測與鄰苯二胺進行顯色反應后，最后用酶標儀讀取吸光度。

優選的，所述步驟1中稀釋液為碳酸鹽緩沖液，稀釋的濃度為5-10ug/ml。

優選的，所述步驟1中酶標板過夜的溫度為3-4℃。

優選的，所述步驟5中反應的溫度為30-36℃，反應時間為10-20分鐘。

優選的，所述清洗液為PBS溶液與質量濃度為0.04％-0.06％的吐溫20組成，其中吐溫20占清洗液質量的0.08％-0.12％。

(三)有益效果