[發明專利]一種離子液體再生纖維素固定化酶的制備方法

有效

• 申請號: 202010402337.0
• 申請日: 2020-05-13
• 公開（公告）號: CN111534506B
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發明（設計）人: 林金新;黃平;郭小雷
• 申請（專利權）人: 福州三合元生物科技有限公司
• 主分類號: C12N11/12
• 分類號: C12N11/12
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 裴金華

1.一種離子液體再生纖維素固定化酶的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）載體制備：將纖維素溶解于離子液體中，得到離子液體/纖維素混合溶液；然后將離子液體/纖維素混合溶液用注射器滴加至去離子水中，使得離子液體/纖維素混合溶液再生成小球；將小球用去離子水沖洗后自然晾干，得到微球載體；

（2）載體改性：將所述微球載體加入到高碘酸鈉溶液中，采用濃度為0.5~1mol/L的高碘酸鈉溶液，微球載體和高碘酸鈉的投加比例為1g：（0.05~0.1）mol；改性結束后取出微球載體，直接冷凍凍干，使得部分高碘酸鈉附著在微球載體上，得到高碘酸鈉改性的微球載體；

（3）酶處理：選用木瓜蛋白酶或谷氨酸脫羧酶制成酶液，所述酶液的濃度為4~7mg/mL；于酶液中加入還原型谷胱甘肽，并使得還原型谷胱甘肽的濃度為0.3~0.8mg/mL，得到活性處理后的酶液；

（4）載酶：將改性的微球載體加入到活性處理后的酶液中，酶和微球載體的混合質量比為（0.25~0.3）：1；密封、并置于25~30℃水浴震蕩12~16h，然后取出微球載體、并用去離子沖洗，冷凍凍干得到固定化酶；過量的高碘酸鈉將還原性谷胱甘肽中的活潑巰基-SH氧化為具有吸電子性的砜。

2.根據權利要求1所述的一種離子液體再生纖維素固定化酶的制備方法，其特征在于：步驟（2）中，微球載體加入到高碘酸鈉溶液中反應90~120min。

3.根據權利要求1所述的一種離子液體再生纖維素固定化酶的制備方法，其特征在于：冷凍凍干條件均為：以液氮于-85℃~-75℃下冷凍干燥18~24h。

4.根據權利要求1所述的一種離子液體再生纖維素固定化酶的制備方法，其特征在于：步驟（1）中，纖維素和離子液體的投加質量比為（10~15）：100。

5.根據權利要求1所述的一種離子液體再生纖維素固定化酶的制備方法，其特征在于：步驟（1）中，將纖維素溶解于離子液體中，置于100~120℃下磁力攪拌溶解5~7h后靜置12~16h，得到離子液體/纖維素混合溶液。

6.根據權利要求1所述的一種離子液體再生纖維素固定化酶的制備方法，其特征在于：所述離子液體選用[BMIM]Cl、[C₄MIM]Cl中的一種。