[發明專利]一種液相色譜串聯四級桿質譜檢測血漿中游離的和總的依折麥布的方法

有效

• 申請號: 202010401843.8
• 申請日: 2020-05-13
• 公開（公告）號: CN111458440B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發明（設計）人: 余麗英;郝光濤;馬章儒;胡川
• 申請（專利權）人: 北京陽光德美醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發明公開了一種液相色譜串聯四級桿質譜檢測血漿中游離的和總的依折麥布的方法。它包括如下步驟：(1)配制標準曲線工作溶液和內標工作溶液；(2)配制標準曲線血漿樣品：取步驟(1)中標準曲線工作溶液，與人空白血漿中混勻配制而成；(3)標準曲線血漿樣品和人血漿樣品前處理時加入內標工作溶液；(4)將步驟(3)中處理后的樣品采用LC?MS/MS進行檢測，以標準曲線血漿樣品的依折麥布與依折麥布?D₄色譜峰峰面積比為縱坐標，以標準曲線血漿樣品的濃度為橫坐標，進行線性回歸，得到標準曲線；將所述血漿樣品中依折麥布與依折麥布?D₄的色譜峰峰面積比，代入所述標準曲線中計算，即能得到血漿中游離的和總的依折麥布的含量。本發明測定簡單、快捷、結果準確。

技術領域

本發明涉及一種液相色譜串聯四級桿質譜檢測血漿中游離的和總的依折麥布的方法，屬于藥物分析技術領域。

背景技術

依折麥布是第一個也是目前唯一的膽固醇吸收抑制劑，主要抑制腸道對膳食和膽汁中的膽固醇吸收而降低血總膽固醇與低密度脂蛋白膽固醇，本品作為飲食控制以外的輔助治療，可單獨或與HMG-CoA還原酶抑制劑(他汀類)聯合應用于治療原發性(雜合子家族性或非家族性)高膽固醇血癥，可降低總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、載脂蛋白B(Apo B)。被廣泛的應用于原發性高膽固醇血癥、純合子家族性高膽固醇血癥和純合子谷甾醇血癥。

依折麥布口服后大部分在小腸和肝臟通過葡萄糖醛酸化，快速代謝為有藥理活性的酚羥基葡萄糖苷酸化物(依折麥布-葡萄糖苷酸結合物)，隨后經膽汁和腎臟分泌，血漿中，依折麥布-葡萄糖苷酸結合物占依折麥布總量的80-90％，且葡萄糖醛酸代謝物比原藥能更有效抑制膽固醇吸收，所以檢測游離的和結合部分的依折麥布是很有必要的。依折麥布在人體內代謝過程中，會產生三個主要的依折麥布-葡萄糖苷酸結合物異構體，導致難以直接檢測依折麥布-葡萄糖苷酸結合物，可以通過酶解得到總的依折麥布，測定游離的和總的依折麥布來間接得到依折麥布-葡萄糖苷酸結合物的含量。由于依折麥布和酚羥基葡萄糖苷酸化物的濃度較低，其體內定量方法，需要一種高靈敏、通用、簡單、快捷、準確的方法進行檢測。

發明內容

本發明的目的是提供一種液相色譜串聯四級桿質譜檢測血漿中游離的和總的依折麥布的方法，本發明采用LC-MS/MS方法定量檢測血漿中游離的和總的依折麥布的濃度，測定簡單、快捷、結果準確，并將該方法應用于依折麥布的藥代動力學研究，為依折麥布的臨床生物等效性研究奠定技術基礎。

本發明提供的一種液相色譜串聯四級桿質譜檢測血漿中游離的和總的依折麥布的方法，包括如下步驟：

(1)配制標準曲線工作溶液和內標工作溶液：

所述標準曲線工作溶液為2.00～5000ng/mL的依折麥布標準溶液；

所述內標工作溶液為依折麥布-D₄用乙腈稀釋成濃度為0.500～5.00ng/mL的依折麥布-D₄工作溶液；

(2)配制標準曲線血漿樣品：

取步驟(1)中所述標準曲線工作溶液，加入到人空白血漿中渦旋混勻，配制成濃度為0.10～250ng/mL的標準曲線血漿樣品；

(3)標準曲線血漿樣品、人血漿樣品前處理過程如下述a)-b)：

a)用于測定總依折麥布的所述標準曲線血漿樣品、所述人血漿樣品的前處理：將所述標準曲線血漿樣品或所述人血漿樣品與0.5M乙酸銨緩沖液、β-葡萄糖醛酸酶混合，然后孵育；經所述孵育完成后加入步驟(1)中所述內標工作溶液渦旋混合，并離心，取上清液并稀釋；

b)用于測定游離依折麥布的所述標準曲線血漿樣品、所述人血漿樣品的前處理：將所述標準曲線血漿樣品或所述人血漿樣品與步驟(1)中所述內標工作溶液渦旋混合，并離心，取上清液并稀釋；