[發(fā)明專利]一株赭曲霉菌株L1295及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010394465.5
• 申請日: 2020-05-11
• 公開（公告）號: CN111849791B
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發(fā)明（設計）人: 劉宏偉;韓俊杰
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12P17/06;C07D311/76;C12R1/66
• 代理公司: 北京律和信知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 11446
• 代理人: 張羽;武玉琴

本發(fā)明公開了一株赭曲霉(Aspergillus westerdijkiae)菌株L1295 CGMCC N_O.19033。該菌株已于2019年12月10日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No.19033，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號。該菌株具有高效赭曲霉毒素A(OTA)合成能力，其發(fā)酵提取物中含有高達4.5％赭曲霉毒素A(OTA/發(fā)酵提取物比)。

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及微生物菌株技術(shù)領域。

背景技術(shù)

真菌毒素(mycotoxin)是產(chǎn)毒真菌分泌產(chǎn)生的，能引起人畜各種損害的次級代謝產(chǎn)物。很早以來人們就已經(jīng)知道有些蘑菇是有毒的，然而直到19世紀50年代才發(fā)現(xiàn)被麥角菌感染的黑麥的中毒癥狀，之后有關真菌毒素對人畜的危害時有報道，關于真菌毒素的研究也成為世界各國科學家的研究熱點。

赭曲霉毒素A(OTA)毒性最大，在霉變谷物、飼料等最常見。OTA 通過攝食進入動物體內(nèi)，經(jīng)小腸吸收后，主要分布于腎臟、肝臟、肌肉與脂肪中。OTA既能產(chǎn)生急性、亞急性毒性，也可以具有致畸和致癌作用，但是未發(fā)現(xiàn)致突變作用。隨人們對食品的健康和安全高度重視，對真菌毒素的檢測越來越嚴格，檢測范圍越來越廣泛。目前國內(nèi)檢測所需OTA標準物質(zhì)絕大多數(shù)依賴于進口，價格昂貴。為了保證檢測分析所需OTA標準物質(zhì)的供應，減少進口依賴。篩選獲得OTA 高產(chǎn)菌株，對其進行發(fā)酵培養(yǎng)，從中分離純化高純度的OTA，將為 OTA的分析檢測提供來源，也為深入研究OTA及其開發(fā)利用提供物質(zhì)基礎。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一目的是提供一株赭曲霉(Aspergillus westerdijkiae) 菌株L1295CGMCC No.19033。

該菌株已于2019年12月10日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No.19033，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號。

本發(fā)明的第二目的是提供了赭曲霉菌株L1295在制備赭曲霉毒素 A中應用。

本發(fā)明的第三目的是提供了一種赭曲霉菌株L1295制備赭曲霉毒素A的方法，其步驟包括：

用赭曲霉菌株L1295制備種子液；

用種子液制備菌株L1295固體發(fā)酵培養(yǎng)物；

用菌株L1295固體發(fā)酵培養(yǎng)物制備提取物；

用反相中壓液相色譜以55-65％的甲醇/水(v/v)溶劑進行洗脫得產(chǎn)物。

進一步地，還包括：用LH-20凝膠色譜以甲醇為洗脫劑進行純化，再經(jīng)甲醇重結(jié)晶，得到高純度赭曲霉毒素A。

本發(fā)明提供的菌株L1295具有高效赭曲霉毒素A合成能力，其發(fā)酵提取物中含有高達4.5％赭曲霉毒素A(OTA/發(fā)酵提取物比)。

附圖說明

圖1為菌株L1295的菌落形態(tài)及鏡下形態(tài)圖。

圖2為菌株L1295與標準品OTA的HPLC對照圖。

圖3為菌株L1295樣品的LC-MS分析結(jié)果的圖譜。

圖4為菌株L1295樣品中OTA的LC-MS分析結(jié)果圖。

圖5為化合物赭曲霉毒素A的氫譜圖。

具體實施方式

下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明的優(yōu)選實施方式進行詳細說明。需要理解的是以下實施例的給出僅是為了起到說明的目的，并不是用于對本發(fā)明的范圍進行限制。本領域的技術(shù)人員在不背離本發(fā)明的宗旨和精神的情況下，可以對本發(fā)明進行各種修改和替換。