[發明專利]抗VSIG4單克隆抗體及其用途

在審

• 申請號: 202010393904.0
• 申請日: 2020-05-11
• 公開（公告）號: CN111574627A
• 公開（公告）日: 2020-08-25
• 發明（設計）人: 潘宗富;葛明華;黃萍;張軼雯;李璐
• 申請（專利權）人: 潘宗富
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K14/705;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 杭州知見專利代理有限公司 33295
• 代理人: 趙越劍

本發明公開了一種抗VSIG4單克隆抗體，根據VSIG4抗原表位特異性分析，合成VSIG4特異性多肽，將VSIG4特異性多肽與KLH偶連后作為抗原免疫BALB/c小鼠，取免疫后BALB/c小鼠的脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞Sp2/0融合，篩選獲得分泌抗VSIG4單克隆抗體的雜交瘤細胞，抗VSIG4單克隆抗體的雜交瘤細胞采用動物體內生產法或體外培養法生產獲得抗VSIG4單克隆抗體。本發明獲取了VSIG4特異結合且具有抗腫瘤活性的單克隆抗體，適用于甲狀腺未分化癌及胰腺癌等癌癥的治療。

技術領域

本發明涉及抗體生產技術領域，特別涉及一種抗VSIG4單克隆抗體及其用途。

背景技術

甲狀腺癌是最常見的內分泌系統惡性腫瘤，也是近20年來發病率增長最快的人類惡性腫瘤之一。2018年世界范圍甲狀腺癌新發病例近56.7萬例，其中中國約19.4萬例，已成為我國多個地區女性第一高發惡性腫瘤，嚴重威脅我國居民的健康[1]。甲狀腺癌分多種類型，其中，絕大多數是乳頭狀甲狀腺癌，占了80%-90%，剩下10%-20%里包括濾泡癌、髓樣癌、低分化癌、未分化癌等。除了甲狀腺乳頭狀癌，其它幾種類型的甲狀腺癌預后差，尤其是甲狀腺未分化癌（Anaplastic Thyroid Carcinoma, ATC），堪稱人類最惡性的腫瘤之一。ATC患者的中位生存期不足6個月，1年生存率約17%，而5年生存率僅8%。2018年全國ATC新發病例近4000例，新增死亡病例約3440例，占甲狀腺癌死亡總數的40%。ATC進展迅速，手術、外放射、碘131 、藥物治療療效均極其有限，患者常死于局部腫瘤擴張引起的窒息或腫瘤遠處轉移[2-3]。因此，目前亟需尋找有效的治療新靶點，以期突破該類患者的治療瓶頸。

腫瘤相關巨噬細胞（Tumor Associated Macrophage, TAM）是腫瘤間質中數量最多的炎癥細胞群，可促進腫瘤增殖、侵襲、轉移及血管新生，尤其是腫瘤免疫逃逸[4]。研究表明，甲狀腺癌中TAM的數量與生存期負相關，是甲狀腺癌預后不利因素[5]。Caillou等發現在ATC組織中，TAM數量約占腫瘤組織細胞總量57%，且相互聯系形成網狀結構[6]，這種病理結構為ATC細胞提供極佳的“免疫豁免區”。生理免疫狀態下，巨噬細胞識別抗原后首先將表面抗原肽-MHC分子復合物呈遞給T細胞識別，并通過表達協同刺激信號B7分子與T細胞表面CD28結合活化T細胞，進而介導免疫應答。然而在腫瘤微環境中，TAM表型及功能受腫瘤細胞嚴密調控，TAM大量表達負性共刺激分子與PD-1、CTLA-4等免疫檢查點蛋白，抑制T細胞抗腫瘤免疫應答，促使腫瘤發生免疫逃逸[7]。與正常細胞相比，ATC細胞作為一種截然不同的“非己”成分，理論上會被宿主免疫系統識別并清除，然而，ATC細胞的生長卻無法被免疫系統限制，因此，尋找腫瘤免疫逃逸機制并解除免疫抑制是治療ATC的潛在策略。

隨著近幾年免疫檢查點抑制劑在實體瘤治療中的成功，免疫療法為惡性腫瘤的治療帶來新思路。已有個案報道對存在BRAF突變及PD-L1高表達的ATC患者通過維羅非尼聯合納武單抗進行治療，可使患者腫瘤明顯消退，且可持續20個月[8]。該研究提示免疫療法在ATC治療中的潛力，但值得注意的是，Ahn等通過407例甲狀腺癌組織進行PD-L1免疫組化染色，發現ATC組織中腫瘤細胞和免疫細胞PD-L1表達陽性率僅為22.2%和11.1% [9]，提示該方案并不適合于多數ATC患者的治療。

VSIG4與PD-L1，PD-L2同屬于B7家族，可抑制T細胞功能或補體旁路途徑的活化，從而調節自身免疫疾病及炎癥疾病的發展[10-11]。Hepatology的研究表明，枯否細胞表達VSIG4可對抗T細胞及NK細胞引起的自身免疫肝損傷[12]。最新的研究發現，VSIG4可抑制殺傷型巨噬細胞（M1）極化，改善爆發性肝炎及高脂飲食引起的肥胖[13]。流行病學結果顯示，VSIG4強表達是惡性膠質瘤、非小細胞肺癌等腫瘤的預后不利因素[14-15]。然而，VSIG4如何促進腫瘤的發生發展研究甚少，目前僅有研究指出VSIG4陽性TAM可促進肺癌的發展[15]。