[發明專利]一種LC-MS/MS測定血漿中阿哌沙班濃度的方法

在審

• 申請號: 202010390556.1
• 申請日: 2020-05-11
• 公開（公告）號: CN111521707A
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發明（設計）人: 江翊國;錢曉萍;孫葉
• 申請（專利權）人: 蘇州必宜生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種LC?MS/MS測定血漿中阿哌沙班濃度的方法，包括如下步驟：（1）對血漿樣品進行前處理；（2）采用LC?MS/MS法測定步驟（1）中經前處理后的血漿樣品中阿哌沙班的濃度；所述LC?MS/MS法包括色譜條件和質譜條件，其中：所述色譜條件包括：以含0.1%甲酸和5 mM醋酸銨的水溶液作為A相，以體積比為100:0.2的乙腈?甲酸為B相，A相與B相的體積比為50:50；等度洗脫，洗脫時間為3min；所述質譜條件包括：離子源：ESI；檢測方式：正離子；離子源溫度500℃；掃描方式：多反應監測。采用本發明的方法可以實現在低色譜系統壓力條件下對血漿中阿哌沙班濃度的檢測；而且血漿用量少，樣品前處理簡單。

技術領域

本發明涉及藥物分析技術領域，具體涉及一種LC-MS/MS測定血漿中阿哌沙班濃度的方法。

背景技術

阿哌沙班(Apixaban，APX) 是一種強效、高選擇性的抑制Xa 因子活性位點的口服抗凝血藥物，由百時美施貴寶和輝瑞公司共同研發，2013年4月在中國上市。阿哌沙班通過抑制 Xa 因子，減少凝血酶的產生，從而抑制血栓形成，臨床用于預防髖關節或膝關節擇期置換術后靜脈血栓栓塞 ( venous throm- boembolism，VET)。

由于原研藥是經過對成千上萬種化合物層層篩選，并經過嚴格的臨床前和臨床試驗驗證才得以獲準上市的原創性新藥，其研發通常需要花費10年左右的時間和10億美元左右的投入，因此原研藥通常價格比較昂貴，以此為廠家提供經濟上的投資回報，同時鼓勵其繼續研究推出新的藥品。但這也同時帶來了較大的醫療費用負擔。在原研藥專利過期后，各國政府都會積極推動和鼓勵仿制藥投放市場。

阿哌沙班的專利保護即將到期，因此對阿哌沙班仿制藥的研制成為研究的熱點，根據國務院辦公廳關于開展仿制藥質量和療效一致性評價的意見，需要加快仿制藥的一致性評價。因此，國內許多臨床機構開展了阿哌沙班生物等效性研究。為了支持生物等效性研究，需要開發快速、穩定、準確的檢測方法，用以測定受試者血漿中阿哌沙班的濃度。但現有報道的檢測血漿中阿哌沙班濃度的方法主要為UPLC-MS/MS法，其色譜系統壓力比較高，并不適用于常規的高效液相色譜儀。

發明內容

針對上述現有技術，本發明的目的是提供一種LC-MS/MS測定血漿中阿哌沙班濃度的方法。采用本發明的方法可以實現在低色譜系統壓力條件下對血漿中阿哌沙班濃度的檢測；而且血漿用量少，樣品前處理簡單。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種LC-MS/MS測定血漿中阿哌沙班濃度的方法，包括如下步驟：

（1）對血漿樣品進行前處理；

（2）采用LC-MS/MS法測定步驟（1）中經前處理后的血漿樣品中阿哌沙班的濃度；

所述LC-MS/MS法包括色譜條件和質譜條件，其中：

所述色譜條件包括：以含0.1%甲酸和5 mM醋酸銨的水溶液作為A相，以體積比為100:0.2的乙腈-甲酸為B相，A相與B相的體積比為50:50；等度洗脫，洗脫時間為3min；

所述質譜條件包括：離子源：ESI；檢測方式：正離子；離子源溫度500℃；掃描方式：多反應監測（MRM）。

優選的，步驟（1）中，對血漿樣品進行前處理的方法為：向血漿樣品中加入內標溶液，再加入乙腈，渦流混勻，離心10 min。

更優選的，所述內標溶液為50 ng/mL的阿哌沙班-¹³CD₃（APX-¹³CD₃）溶液，內標溶液與血漿樣品加入的體積比為1:1。

更優選的，所述乙腈與血漿樣品加入的體積比為4:1。

更優選的，所述離心的條件為：4℃，3900 rpm。