[發明專利]一種小鼠子宮內膜損傷模型的構建方法及構建得到的模型

在審

• 申請號: 202010385233.3
• 申請日: 2020-05-09
• 公開（公告）號: CN111839798A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 劉彥禮;林俊堂;張勝輝;孫鈺椋;潘瑩;喬梁;楊芬;陳童彤;郭睿
• 申請（專利權）人: 新鄉醫學院
• 主分類號: A61D7/00
• 分類號: A61D7/00
• 代理公司: 河南大象律師事務所 41129
• 代理人: 張繼鋒

本發明屬于動物實驗模型構建技術領域，具體涉及一種小鼠子宮內膜損傷模型的構建方法及構建得到的模型。該子宮內膜損傷模型的構造方法是非創傷性的，包括下述步驟：對小鼠進行呼吸麻醉誘導，麻醉誘導成功后肌肉注射間苯三酚，使用小鼠灌胃針從小鼠陰道進入，探查宮頸松弛后進入子宮角，注射95％乙醇并停留特定時間，之后除去殘留乙醇。小鼠子宮內膜損傷模型的構建方法不會通過剖腹的方式對小鼠子宮局部肌層造成損傷，造模效果穩定且成功率高。

技術領域

本發明屬于動物實驗模型構建技術領域，具體涉及一種小鼠子宮內膜損傷模型的構建方法及構建得到的模型。

背景技術

薄型子宮內膜和宮腔粘連是子宮內膜損傷的常見病癥，對女性健康造成極大威脅且會造成妊娠失敗。妊娠早期的擴張刮除術是造成薄型子宮/宮頸粘連的常見原因。當前主要通過建立子宮內膜損傷模型的方法來對宮腔粘連/薄型子宮內膜進行研究。常見的用于構建子宮內膜損傷模型的動物主要有兔子、大鼠和小鼠。但由于小鼠手術操作難度較大，一般選用大鼠構建子宮內膜損傷模型。

現有技術中的子宮內膜損傷大致可分為三種：子宮全層損傷模型、子宮缺血模型和子宮內膜化學損傷模型。

子宮全層損傷模型的制備方法為：SD大鼠術前禁食1晚，10％戊巴比妥鈉按5mL/kg腹腔注射麻醉后固定大鼠。剃去下腹部毛發，碘伏棉球消毒。在動物實驗中心超凈臺中于恥骨聯合上端2～3cm處挑起外層皮膚，剪刀縱向剪開腹壁皮膚2cm，逐層切開腹層黏膜、肌肉組織，進入腹腔，緩慢挑出大鼠的Y型子宮(雙子宮、雙宮頸、單陰道，兩側宮角互不相通)，于左側子宮造模(IUA—L組)，眼科剪于子宮中段正中央縱向剪開子宮壁，盡量全部剪開(大鼠子宮全長3～4cm)，眼科剪沿著子宮內膜慢慢剪，徹底去除子宮內膜全層，手術過程中無菌紗布隨時止血，保證視野清晰，深度控制在子宮組織淺肌層至深肌層，以確保子宮漿膜面的完整性。子宮內膜切除完成后，7-0顯微無菌手術縫線間斷縫合子宮，清除血液，右側子宮作自身對照(IUA-R組)。Sham假手術組左側子宮(Sham—L組)僅切開再縫合，右側子宮(Sham—R組)不做處理。手術完成后，將子宮還納至腹腔，清洗腹腔，4-0手術縫線關腹。7天和28天后分別處死各組大鼠，子宮取樣，4％多聚甲醛固定組織，48h內石蠟包埋、切片。該造模方法可以使子宮全層損傷的子宮內膜薄弱，但僅手術區域的子宮內膜偏薄，與臨床上人的子宮內膜整體偏薄的情況不同，此造模方法將局部子宮內膜及肌層同時損傷，很難做到大鼠整體的內膜偏薄。

子宮缺血模型的具體造模方法為：麻醉大鼠后，開腹暴露子宮，結扎雙側子宮角動脈，術后3個月，于發情期處死大鼠取子宮組織，發現SD大鼠子宮內膜缺血過后，子宮內膜變薄，腺體減少，腺上皮細胞受損。該造模方法成模時間長且大鼠的老齡化也會對實驗造成影響。

子宮內膜化學損傷模型是通過采用95％乙醇對大鼠子宮內膜進行化學損傷，主要利用無水乙醇對組織、細胞的脫水作用，以及可使蛋白質變性的特點。文獻《乙醇作用時間對大鼠子宮內膜損傷的影響》(南楠等，《生殖醫學雜志》，2019年1月第28卷第1期，P66-10)公開的造模方法為：用10％水合氯醛溶液對大鼠進行麻醉，注射劑量為3mL/Kg，麻醉后放入無菌手術臺，仰臥，消毒后腹部陰道口向上1cm左右進行開口，輕輕夾出V型子宮，用動脈夾夾住子宮近陰道端，用注射器分別向子宮推入300-500微升95％乙醇，使子宮保持充盈狀態。左右結束后將95％乙醇吸出，并用生理鹽水洗滌子宮腔3遍，將子宮塞回，縫合傷口并消毒放回。

上述3種造模方法均需通過開腹的方式來構建宮腔粘連/薄型子宮內膜平臺，操作復雜，且造模效果不穩定，與臨床常見原因的子宮內膜損傷特點存在差異，有待進一步改進。

發明內容

發明人在研究中發現：現有技術通過開腹方式建造模型，必須經子宮外側漿膜層及肌層進入，會造成子宮局部全層的損傷，與臨床常見原因造成IUA的損傷特點存在差異。本構建方法采用小鼠作為模型動物，通過微創的方式保留子宮全層結構，經宮頸乙醇灌注法構建得到宮腔粘連模型。