[發(fā)明專利]一種ACE2-Albumin重組蛋白及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010375623.2
• 申請(qǐng)日: 2020-05-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111635461A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-09-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盛劍鵬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 乾元康安（蘇州）生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N9/48;C12N15/62;C12N15/85;C07K1/22;A61K38/48;A61K47/64;A61P31/14;G01N15/14
• 代理公司: 蘇州市方略專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32267
• 代理人: 石磊

1.一種ACE2-Albumin重組蛋白，其特征在于，所述重組蛋白同時(shí)包含ACE2蛋白和Albumin蛋白的活性結(jié)構(gòu)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種ACE2-Albumin重組蛋白，其特征在于，所述重組蛋白含有SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10中的的部分或者全部氨基酸序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種ACE2-Albumin重組蛋白，其特征在于，所述SEQ ID NO.10的N端連接于所述SEQ ID NO.9的C端。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種ACE2-Albumin重組蛋白，其特征在于，所述重組蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示。

5.編碼如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的ACE2-Albumin重組蛋白的核苷酸序列。

6.一種如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的ACE2-Albumin重組蛋白的生產(chǎn)載體的構(gòu)建方法，其特征在于，包含以下步驟：

(1)以ACE2 cDNA為模板，利用序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物和序列如SEQ IDNO.2所示的反向引物進(jìn)行PCR，擴(kuò)增出序列如SEQ ID NO.3所示的基因片ACE2；

(2) 以Albumin cDNA為模板，利用序列如SEQ ID NO.4所示的正向引物和序列如SEQID NO.5所示的反向引物進(jìn)行PCR，擴(kuò)增出序列如SEQ ID NO.6所示的基因片段Albumin；

(3) 以步驟1和2得到的基因片段ACE2與Albumin為模板，利用序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物和序列如SEQ ID NO.5所示的反向引物進(jìn)行Overlap PCR得到序列如SEQ IDNO.7所示的融合基因片段ACE2-Albumin；

(4) 將步驟3得到的目的基因片段ACE2-Albumin利用酶切克隆至載體得到ACE2-Albumin重組蛋白的生產(chǎn)載體。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的ACE2-Albumin重組蛋白的生產(chǎn)載體的構(gòu)建方法，其特征在于，所述酶切的位點(diǎn)為XhoI和NotI，所述克隆載體為pMyc-IRES-GFP，所述得到的ACE2-Albumin重組蛋白的生產(chǎn)載體為pMyc-ACE2-Albumin-IRES-GFP，其序列如SEQ ID NO.8所示。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的ACE2-Albumin重組蛋白的生產(chǎn)載體的構(gòu)建方法來(lái)表達(dá)ACE2-Albumin重組蛋白的方法，包括如下步驟：

(1) 培養(yǎng)細(xì)胞；

(2) 將獲得的ACE2-Albumin重組蛋白的生產(chǎn)載體轉(zhuǎn)染至上述細(xì)胞；

(3) 培養(yǎng)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞并收取ACE2-Albumin重組蛋白。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的表達(dá)ACE2-Albumin重組蛋白的方法，其特征在于，所述細(xì)胞為真核或者原核細(xì)胞，包括但不限于FreeStyle 293-F。

10.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的ACE2-Albumin重組蛋白在制備用于用于冠狀病毒的檢測(cè)和治療用的試劑盒或者藥物中的作用。