[發(fā)明專利]一種富貴竹莖尖脫毒快繁的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010374974.1
• 申請日: 2020-05-07
• 公開（公告）號: CN111528091B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 殷學(xué)貴;陸建農(nóng);黃邦盈;張力;江宇健
• 申請（專利權(quán)）人: 湛江市蘭盈農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務(wù)所有限公司 44228
• 代理人: 李慧

1.一種富貴竹莖尖脫毒快繁的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）減毒苗的準(zhǔn)備：取健康富貴竹竹莖，剪取10-20cm，恒溫培養(yǎng)，形成側(cè)芽；

所述恒溫培養(yǎng)條件為：先以恒溫箱溫度50±2℃，處理30±5min，然后再以恒溫箱溫度38±1℃，光照強度3000lux，恒溫培養(yǎng)5-6周；

（2）材料消毒：將步驟（1）培養(yǎng)的側(cè)芽切下，去掉葉片和葉鞘，洗凈，依次用75%的酒精、次氯酸鈉溶液振蕩消毒，然后用無菌水沖洗干凈；

（3）材料暗處理：將步驟（2）洗凈的材料中接觸到酒精、次氯酸鈉溶液的部分切除，切至距離生長點1 cm處，并去除老葉，縱切兩半，將橫截面接種于暗處理培養(yǎng)基MS+2,4-D 0.5-2.0 mg/L，進行暗處理；

（4）叢生芽誘導(dǎo)：將經(jīng)過暗處理的材料接種到MS+BA 1.0-5.0mg/L+NAA 0.1-0.5mg/L培養(yǎng)基中進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，形成叢生芽；

（5）脫毒苗病毒的檢測：取叢生芽組織體進行Badnavirus病毒的檢測，選擇無毒叢生芽，準(zhǔn)備進行繼代增殖；

（6）叢生芽的繼代增殖：在無菌條件下，將步驟（5）獲得的無毒叢生芽自然分開成單株或多株，接種于含MS+BA 1.0-5.0mg/L+NAA 0.1-0.5mg/L的培養(yǎng)基中，待長成叢芽后再次繼代；

（7）生根培養(yǎng)：將步驟（6）得到的采用固體培養(yǎng)基1/2MS+ NAA 0.5 mg/L+活性炭0.5 g/L進行生根培養(yǎng)；

（8）煉苗：當(dāng)步驟（7）獲得的組培苗假莖高4~5cm，并且發(fā)達根系后，移出培養(yǎng)室，在過渡室內(nèi)將瓶蓋除去煉苗，于假植前2～3d進行，得到叢苗；

（9）材料移栽：假植前，把叢苗取出，用清水沖洗凈培養(yǎng)基，然后移到育苗盤，馬上淋足定根水，然后用遮陽網(wǎng)遮蓋。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）所述材料消毒的方式是：將側(cè)芽切下，去掉葉片和葉鞘，用無菌水沖洗干凈，接著用75%的酒精浸泡處理30 s，然后放到2%的次氯酸鈉溶液振蕩20 min，最后用無菌水沖洗3~5次至無泡沫產(chǎn)生。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（3）所述暗處理時間為3-4d。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（4）所述接種后培養(yǎng)40～45d。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（5）所述病毒的檢測采用PCR檢測。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（6）所述叢生芽的繼代增殖，具體是：在無菌條件下將叢生芽自然分開成單株或多株，接種于含MS+BA 1.0-5.0mg/L+NAA 0.1-0.5mg/L的培養(yǎng)基中，待長成叢芽后再次繼代，20～25d繼代1次。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（7）中，生根培養(yǎng)條件是：光照強度3000lux，25~28℃溫度下培養(yǎng)15~20d。