[發明專利]一種狂犬病疫苗的純化方法

在審

• 申請號: 202010355890.3
• 申請日: 2020-04-29
• 公開（公告）號: CN111467486A
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發明（設計）人: 楊文彬;余軍;蔣世鵬;金曉鐘;王劍飛;帥旗;張赟;趙越;李凡;唐陽;朱實惠;望朔;吳建華;夏建國;趙靜;付建林
• 申請（專利權）人: 江蘇金迪克生物技術股份有限公司
• 主分類號: A61K39/205
• 分類號: A61K39/205;A61P31/14;C12N7/00
• 代理公司: 北京中政聯科專利代理事務所(普通合伙) 11489
• 代理人: 何浩

本發明公開了一種狂犬病疫苗的純化方法，包括采用含有硅羥基的硅化合物載體進行吸附純化，以及在狂犬病疫苗病毒液中加入帶有堿金屬離子的緩沖液。本發明不僅解決了狂犬病疫苗以往在生產過程中單一采用柱層析方法DNA難去除、蛋白質容易聚合沉淀的問題或者依賴于添加非限制性核酸內切酶、魚精蛋白等化合物對疫苗安全性有影響的問題，在保證疫苗效價的前提下，針對現有的去除宿主DNA方法的不足，本采用物理吸附的方式純化狂犬病疫苗中的宿主DNA，將二氧化硅入特制的濾器中，加入收獲液進行過濾純化。通過硅化物對DNA的特異性吸附作用，在可接受的抗原回收率下，可以從狂犬病疫苗中吸附宿主DNA，對斷裂的宿主DNA也有吸附能力，對疫苗的安全性沒有影響。

技術領域

本發明涉及疫苗生產的提純方法，具體是一種狂犬病疫苗的純化方法。

背景技術

狂犬疫苗的生產需要經過Vero細胞培養、病毒增殖、病毒收獲、純化等過程，其中Vero細胞具有無限傳代的能力，具有整合入接種者基因組、成為癌變的潛在誘發條件的風險，因此《中國藥典》中對其DNA在狂犬疫苗中的濃度限制較為嚴格。作為狂犬疫苗中主要的雜質之一，Vero細胞DNA一般產生于細胞培養時的機械攪拌、病毒增殖造成的細胞凋亡及破碎等過程。出于安全性考慮，《中華人民共和國藥典規定》，經雜交法檢測狂犬疫苗DNA含量合格標準為100pg/mL。但是經檢測，中間產品DNA含量可高達10000pg/mL，單純依靠柱層析法純化不僅成本增加、抗原損失量大，而且純化效果不理想。去除宿主DNA成為狂犬病疫苗(Vero細胞)生產純化的難題。

現有的專利公開了以魚精蛋白和非限制性核酸內切酶為主的DNA去除法，如專利CN 101270350 A，但是兩種試劑和成本高并且這些措施意味著在狂犬病疫苗中引入了新的雜質，且魚精蛋白的加入會大大降低病毒抗原的含量，病毒回收率僅為20～30％，不僅提高了潛在的安全性風險和生產過程中純化的難度還提高了疫苗生產的成本。

而針對其他的采用離子交換介質去除狂犬疫苗的已公開專利，如CN 103571800B，DNA去除率為99％，但工藝復雜，抗原回收率僅為50％左右。大大提高了疫苗生產的成本。

因此本發明的目的為采用物理吸附的方式吸附狂犬疫苗中的殘留Vero細胞DNA，使其與疫苗中間產品分離，達到去除宿主DNA的目的。該方法簡便、操作便捷、更符合大規模生產的需要。

發明內容

本發明的目的在于提供一種狂犬病疫苗的純化方法，以解決現有技術中的工藝復雜，回收率低，導致的疫苗生產成本較高的技術難題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種專利名稱狂犬病疫苗的純化方法，具體純化步驟包括：采用含有硅羥基的硅化合物載體進行吸附純化，以及在狂犬病疫苗病毒液中加入帶有堿金屬離子的緩沖液。

與現有技術相比，上述技術方案的有益效果是：

在保證疫苗效價的前提下，針對現有的去除宿主DNA方法的不足，上述技術方案采用物理吸附的方式純化狂犬病疫苗中的宿主DNA，在疫苗純化過程中加入含有硅羥基的硅化合物載體，對收獲液進行過濾純化。通過硅化物對DNA的特異性吸附作用，在可接受的抗原回收率下，可以從狂犬病疫苗中吸附宿主DNA，對斷裂的宿主DNA也有吸附能力，對疫苗的安全性沒有影響；另外，在保證疫苗不引入新的化學雜質的情況下，采用物理方法有效吸附去除宿主DNA的含量，提高疫苗產品質量及合格率，為疫苗純化提供新方法。

具體實施方式

下面將結合本發明實施例，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。