[發(fā)明專利]一種大麗花外植體表面滅菌方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010355528.6
• 申請(qǐng)日: 2020-04-29
• 公開（公告）號(hào): CN111642392A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鹿國(guó)濤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海潤(rùn)繡農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京眾澤信達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11701
• 代理人: 張艷萍

本發(fā)明提供一種大麗花外植體表面滅菌方法，其特征在于：采集4月份大麗花當(dāng)年生健康花托，用洗衣粉清洗灰塵后在自來水流水中沖洗30min。轉(zhuǎn)入無菌室后，在超凈工作臺(tái)上，用70％的乙醇溶液將花托消毒15?30s，再用無菌水沖洗2?3次，每次1?2min，然后用0.1％的氯化汞溶液消毒8?10min，隨后再用無菌水反復(fù)沖洗3?5次，每次1?2min，用吸水紙吸干水分后，接種于培養(yǎng)基中。本發(fā)明所述的滅菌方法所得愈傷組織誘導(dǎo)率高，且污染率較低，操作相對(duì)簡(jiǎn)單，易于實(shí)現(xiàn)。相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)做出了改進(jìn)，能夠培養(yǎng)出理想的外植體，在組織培養(yǎng)中有良好的適應(yīng)性，存活率高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種植物外植體表面滅菌方法，屬于植物組培技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

大麗花(Dahlia pinnata Cav.)，別名大理花、天竺牡丹、東洋菊、大麗菊、地瓜花等，屬菊科、大麗花屬植物，多年生草本，有巨大棒狀塊根。莖直立，多分枝，是歐美發(fā)達(dá)國(guó)家常見的草本花卉種類。由于其植株優(yōu)美，花色花形譽(yù)名繁多，豐富多彩，對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性強(qiáng)，常出現(xiàn)在園林應(yīng)用中。

大麗花繁殖傳統(tǒng)上常采用扦插繁殖和分株繁殖。扦插繁殖世代變異大，難以保持原有品種的優(yōu)良性狀；分株繁殖系數(shù)低，無法滿足產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的要求。

本發(fā)明在參照前人研究的基礎(chǔ)上，以幼嫩花托為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，以期快速實(shí)現(xiàn)大量種苗的供給。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種大麗花外植體表面滅菌方法，其優(yōu)勢(shì)在于所述的滅菌方法所得愈傷組織誘導(dǎo)率高，且污染率較低，操作相對(duì)簡(jiǎn)單，易于實(shí)現(xiàn)。

它包括如下步驟：

1)外植體的選擇：采集4月份大麗花當(dāng)年生健康花托；

2)外植體的預(yù)處理：用洗衣粉溶液清洗所述外植體表面污垢；

3)外植體的消毒：轉(zhuǎn)入無菌室后，用70％的乙醇溶液和0.1％的氯化汞溶液對(duì)所述外植體進(jìn)行消毒，即得。

本發(fā)明所述的滅菌方法，步驟1)外植體的選擇，優(yōu)選大麗花當(dāng)年生健康花托作為外植體的健康植株。選擇當(dāng)年生健康花托作為外植體，有助于很快形成大量的愈傷組織，且污染率較低，且易形成叢芽，芽健壯，質(zhì)量高，是較理想的外植體材料。

本發(fā)明所述的滅菌方法，步驟2)外植體的預(yù)處理，采用濃度為10-20ppm的洗衣粉溶液清洗外植體表面污垢，然后用自來水沖洗干凈。

本發(fā)明所述的滅菌方法，步驟3)外植體的消毒，轉(zhuǎn)入無菌室后，在超凈工作臺(tái)上，用70％的乙醇溶液將花托消毒15-30s，再用無菌水沖洗2-3次，然后用0.1％的氯化汞溶液消毒8-10min，隨后再用無菌水反復(fù)沖洗3-5次，用吸水紙吸干水分后，接種于培養(yǎng)基中。

每次消毒后都要用無菌水沖洗，以徹底除去氯化汞。消毒和涮洗時(shí)都要充分?jǐn)嚢?，保證材料各部分與消毒劑或無菌水充分接觸。優(yōu)選用無菌水涮洗3-5次，每次不少于2min。

外植體經(jīng)無菌水涮洗后，需用吸水紙將水分吸干，之后接種于培養(yǎng)基中。

消毒操作在無菌室超凈工作臺(tái)進(jìn)行。

本發(fā)明提供的外植體的滅菌方法，相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)做出了改進(jìn)，能夠培養(yǎng)出理想的外植體，在組織培養(yǎng)中有良好的適應(yīng)性，外植體可以很快的形成大量的愈傷組織，且污染率較低，同時(shí)易形成叢芽，芽健壯，質(zhì)量高。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合本發(fā)明的植物組培消毒方法的應(yīng)用實(shí)例，說明本發(fā)明的具體實(shí)施方式。以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。

1.消毒器皿準(zhǔn)備：

選取250ml塑料組培瓶，清洗干凈，高壓蒸汽消毒備用。

2.消毒劑的準(zhǔn)備：