[發明專利]一種抑霉唑半抗原YM-A、人工抗原、重鏈抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010350486.7
• 申請日: 2020-04-28
• 公開（公告）號: CN111548309B
• 公開（公告）日: 2021-12-24
• 發明（設計）人: 沈玉棟;張詠儀;徐振林;王弘;楊金易;孫遠明;肖治理;雷紅濤
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C07D233/60
• 分類號: C07D233/60;C07K14/77;C07K14/79;C07K16/44;C07K16/06;G01N33/543
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 段卉

本發明公開了一種抑霉唑半抗原YM?A、人工抗原、重鏈抗體及其制備方法和應用。本發明首先提供了一種抑霉唑半抗原YM?A，其結構式如式(I)所示：該抑霉唑半抗原YM?A與待測物抑霉唑的骨架結構重疊度高，有效地提高了抑霉唑半抗原YM?A的免疫原性；進一步利用該抑霉唑半抗原YM?A與乳鐵蛋白偶聯得到的人工抗原作為免疫原免疫羊駝，將免疫效果好的羊駝血清交替使用Protein A和Protein G親和層析柱進行分離，成功制備得到了抑霉唑重鏈抗體；并利用該重鏈抗體建立了一種基于重鏈抗體檢測抑霉唑分析方法，對抑霉唑的最低檢測限為12.39ng/mL，IC₅₀為122.18ng/mL，線性范圍為29.41～507.63ng/mL；且該抑霉唑半抗原YM?A、人工抗原和重鏈抗體的制備方法簡單易行、成本低，應用前景廣泛。

技術領域

本發明屬于生物技術技術領域。更具體地，涉及一種抑霉唑半抗原YM-A、人工抗原、重鏈抗體及其制備方法和應用。

背景技術

抑霉唑又稱烯菌靈，是一種內吸性殺菌劑，對果蔬中常見的青霉病、綠霉病等有很好的防治作用，被廣泛應用于采收后的各種水果和蔬菜的防腐保鮮。研究發現，人體若長期攝入抑霉唑會引起內分泌系統功能紊亂，神經系統及肝臟也會受到影響。由于抑霉唑的濫用，我國對抑霉唑在食品中的殘留量要求越來越嚴格，最新國標GB 2763—2019相對于國標GB 2763-2016新增8個品種檢測。

抑霉唑的檢測要求越來越苛刻，因此，需要一種快速、靈敏、高效的檢測方法來實現抑霉唑的快速檢測。目前，抑霉唑的農藥殘留檢測方法包括氣相色譜-質譜法、液相色譜質譜聯用法、酶聯免疫吸附檢測法、以及其他定量檢測方法；其中，氣相色譜-質譜法、液相色譜質譜聯用法等儀器分析方法其樣本前處理及測定過程繁瑣，費用高、需要專業人員操作，不適于大量樣本篩查；而酶聯免疫吸附檢測法具有靈敏度高、特異性強、儀器設備要求低和樣本前處理相對簡單等優點，是近年來常用的農殘檢測方法。酶聯免疫吸附檢測法基于抗原、抗體之間特異性識別，實現對檢測樣品中目標物的定性、定量分析，其關鍵在于制備出高特異性和高靈敏度的抗體，建立該方法的首要條件是設計合成有效的半抗原及完全抗原。

目前，周映霞等公開了一種抑霉唑半抗原HIA，成功制備得到了抑霉唑人工抗原，并通過免疫動物獲得了效價為1:6400的鼠多抗，采用間接競爭ELISA法測定抗體的IC₅₀值為1.76μg/mL(殺菌劑抑霉唑人工抗原的合成和鑒定，2010)。雖然該抗體能夠識別抑霉唑，但是其識別靈敏度低；并且該半抗原HIA的制備是利用抑霉唑類似物的羥基取代反應，經過取代，水解兩步反應得到，制備過程復雜、步驟繁瑣。因此，提供一種步驟簡便、檢測靈敏度高和特異性強的抑霉唑檢測方法具有重要意義。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有抑霉唑檢測方法的缺陷和不足，提供一種抑霉唑半抗原YM-A、人工抗原、重鏈抗體及其制備方法和應用。本發明制備出的抑霉唑半抗原YM-A的合成方法更加簡單，直接利用抑霉唑分子結構式進行修飾改造，在分子結構式上的碳碳雙鍵氧化成醛基之后，連入帶有一段碳鏈的羧基，直接一步反應使其具有活性基團-羧基。

本發明的第一個目的是提供一種抑霉唑半抗原YM-A。

本發明的第二個目的是提供所述抑霉唑半抗原YM-A的制備方法。

本發明的第三個目的是提供所述抑霉唑半抗原YM-A在制備抑霉唑人工抗原中的應用。

本發明的第四個目的是提供一種抑霉唑人工抗原。

本發明的第五個目的是提供一種檢測抑霉唑的免疫原與包被原的組合。

本發明的第六個目的是提供所述抑霉唑半抗原YM-A、抑霉唑人工抗原或所述免疫原與包被原的組合在檢測抑霉唑或制備抑霉唑檢測試劑盒中的應用。

本發明的第七個目的是提供一種抑霉唑重鏈抗體。

本發明的第八個目的是提供一種檢測抑霉唑的方法。