[發明專利]一種抗腫瘤蛋白ILAP1及其制備和應用

有效

• 申請號: 202010349849.5
• 申請日: 2020-04-28
• 公開（公告）號: CN111499696B
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 王瑩;鮑大鵬;陳洪雨;李燕;汪瀅;鄒根;茅文俊;吳瑩瑩;楊瑞恒;周陳力;萬佳寧;唐利華;尚俊軍;龔明;郭婷;李焱
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C12N15/11;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/16;A61P35/00;C12R1/19
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所(普通合伙) 31233
• 代理人: 黃志達;宋旭

本發明涉及一種抗腫瘤蛋白ILAP1及其制備和應用，所述抗腫瘤蛋白ILAP1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發明公開的制備方法可以制得具有抗腫瘤活性的蛋白，該制備方法操作簡單，效率高，此外，本發明提供的抗腫瘤的蛋白具有明顯的抗腫瘤活性，能夠抑制腫瘤細胞的增殖和促進腫瘤細胞的調亡，其可以用于制備成抗腫瘤藥物。

技術領域

本發明屬于抗腫瘤蛋白領域，特別涉及一種抗腫瘤蛋白ILAP1及其制備和應用。

背景技術

惡性腫瘤是目前危害人類健康的主要疾病之一，其死亡率僅次于心腦血管疾病。其中肺癌是當今世界上最常見的惡性腫瘤之一，其發病率和死亡率呈逐年上升趨勢，己成為人類因癌癥死亡的主要原因。肺癌按組織病理學分為非小細胞肺癌和小細胞肺癌，其中非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)是肺癌最常見的一種病理類型，約占原發性肺癌的70％-80％，其總的5年生存率為8％-11％。

肺腺癌(lung adenocarcinoma)是非小細胞肺癌肺腺癌是肺癌的一種，較容易發生于女性及不抽煙者。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種抗腫瘤蛋白ILAP1及其制備和應用，本發明如SEQ ID NO.1所示的蛋白對腫瘤細胞具有抑制其增殖和促進其調亡的活性，本發明通過基因工程技術手段可以快速方便地大量地制得該蛋白，縮短獲取該蛋白的時間。

本發明提供一種抗腫瘤蛋白ILAP1，所述抗腫瘤蛋白ILAP1的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

本發明提供一種編碼所述抗腫瘤蛋白ILAP1的核苷酸序列，所述核苷酸序列如SEQID NO.2所示。

本發明一種重組大腸表達質粒，所述表達質粒含有所述核苷酸序列。

所述重組表達質粒由如SEQ ID NO.2所示的核酸序列插入到pCreat-SII載體上的BamHI和XhoI限制性酶切位點之間，得到重組表達質粒pCreat-SII-ILAP1。

一種重組細胞，所述重組細胞由所述重組大腸表達質粒轉至感受態細胞中獲得。

所述蛋白具有抗腫瘤活性，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述重組細胞含有編碼所述蛋白的核酸序列。

SEQ ID NO.2所示的核酸序列經過了密碼子的優化，其適用在常用的大腸桿菌中表達，能夠以更高地表達效率表達出所述蛋白，提高該蛋白的產量。

所述重組細胞為大腸桿菌。

本發明的一種抗腫瘤蛋白ILAP1的制備方法，包括：培養重組細胞，從培養產物中分離純化得到所述蛋白。

進一步具體地：

本發明提供一種抗腫瘤蛋白ILAP1的制備方法，包括:

(1)構建所述重組表達載體；

(2)構建含步驟(1)重組表達載體的重組細胞；

(3)培養重組細胞，誘導融合蛋白ILAP1表達；

(4)進行分離純化，得到抗腫瘤蛋白ILAP1。

上述制備方法的優選方式如下：

所述步驟(1)中所述重組表達載體的骨架為pCreat-SII載體，所述核酸序列位于所述重組表達載體的BamHI和XhoI限制性酶切位點之間。

選用合適的表達載體也是提高表達蛋白效率的手段，在本發明的一些實施方案中，選用pCreat-SII載體作為表達載體，該表達載體可以提高表達表達效率，進而提高終培養產物中的蛋白含量。