[發明專利]一種用于構建肝腫瘤無支架類器官的培養基及培養方法

在審

• 申請號: 202010348114.0
• 申請日: 2020-04-28
• 公開（公告）號: CN111411084A
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 羅國安;王義明;范雪梅;羅喆明
• 申請（專利權）人: 江蘇信安佳醫療科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 劉洪勛

本發明公開了一種用于構建肝腫瘤無支架類器官的培養基及培養方法。所述培養基含有以下成分：Advanced DMEM/F12、FBS、雙抗、N?2、Noggin、B?27、EGF、FGF?10、Y?27632、A83?01、SB202190、R?Spondin、N?乙酰半胱氨酸、Nicotinamide、Wnt3A、HGF和Primocin^TM。培養方法是將分離獲取原代腫瘤細胞加入上述專用培養基重懸，計數后接種至超低吸附U型孔板中，離心培養，至形成類器官。本發明培養基及培養方法可實現肝癌原代細胞的體外增殖，可快速構建肝腫瘤無支架類器官，并能保持肝腫瘤類器官的長期穩定生長。采用本發明技術形成的腫瘤類器官保留了患者腫瘤組織的異質性，適用于體外肝癌化療藥物的藥敏檢測及腫瘤發生、發展相關研究。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，尤其涉及一種用于構建肝腫瘤無支架類器官的培養基及培養方法。

背景技術

肝細胞癌在世界癌癥死亡率排名中排名第二位，其具有高轉移率、低預后率、難以治療等特點。腫瘤的惡性侵襲與轉移，導致患者腫瘤復發，治療效果不佳，預后效果比較差。腫瘤細胞一旦轉化為惡性細胞，它的侵襲和遷移能力也會變得異常強大。腫瘤細胞并不只限于單個細胞的遷移。在許多腫瘤類型中，通常觀察到的侵襲單元是細胞群，群體的行為決定惡性功能。二維(two-dimensional，2D)細胞培養已廣泛應用于生物學研究，但在二維水平生長的細胞并不能精確地模擬體內的狀態。相比于2D培養，三維(three-dimensiona，3D)細胞培養通過運用再造細胞外基質(比如Matrigel、collagen I、水凝膠等)、構建支架或借助一定的載體，能夠模擬體內細胞生存環境，為細胞提供一個更加接近體內生存條件的微環境，更有利于開展腫瘤細胞向周圍組織侵襲和遷移的研究，以及建立更接近體內真實環境的藥敏篩選模型。但目前的腫瘤類器官3D培養技術還存在一定不足(Science 364,2019，952–955.)，如：不同器官腫瘤類模型形態不易區分，缺乏代表性；培養周期較長，培養價格相對還是太高；類器官培養多局限于基質膠、水凝膠等基質材料中，該類方式限制了類器官與外界的氣體交換和物質代謝，交換局限性嚴重影響了類器官所需營養物質的吸收以及代謝廢物的清除。針對上述不足，本專利技術提供了一種肝腫瘤無支架3D類器官的培養方法，并將其應用于抗腫瘤藥物藥敏篩選。該培養體系可實現肝腫瘤原代細胞的外快速增殖、提高肝腫瘤3D類器官建模及培養成功率、大幅度降低培養成本和培養周期。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于構建肝腫瘤無支架類器官的培養基及培養方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的本發明采用以下技術方案：一種用于構建肝腫瘤無支架類器官的培養基，其特征在于，由血清替代物N2和B27、Noggin、雙抗、表皮生長因子、成纖維生長因子、選擇性ROCK1抑制劑、ALK5抑制劑、p38 MAPK抑制劑、N-乙酰半胱氨酸、R-Spondin蛋白、煙酰胺、Wnt3A細胞因子、肝細胞生長因子、Primocin^TM、胎牛血清和基礎培養基AdvancedDMEM/F12組成。