[發明專利]一種檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒和新型冠狀病毒的核酸初篩試劑盒

在審

• 申請號: 202010344069.1
• 申請日: 2020-04-27
• 公開（公告）號: CN111455112A
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 黃鳳婷;顓孫永勛
• 申請（專利權）人: 中山大學孫逸仙紀念醫院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/113
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

本發明提供了一種基于CRISPR/Cas12a方式分別檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒和新型冠狀病毒的crRNA以及檢測試劑盒。本發明能精確的檢測出甲型流感病毒、乙型流感病毒和新型冠狀病毒，且本發明的試劑盒相比于傳統的核酸檢測方法，該方案操作性簡便，不依賴熒光定量PCR儀器。本發明試劑盒結合RAA等溫擴增技術、免疫膠體金技術以及Cas12a技術，一次性擴增后，同時對多個病原體進行檢測。

技術領域

本發明屬于核酸檢測技術領域，具體設計一種檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒和新型冠狀病毒的初篩試劑盒。

背景技術

甲型流感、乙型流感和新型冠狀病毒2019-nCoV均為單鏈RNA病毒，在入侵人體后通過自身編碼的RNA依賴RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase，RDRP)直接進行RNA復制并大量擴增。病毒病原體能刺激免疫系統，產生因子風暴，引起機體器官損害。病毒能引發呼吸道感染，出現發燒、咳嗽等相似癥狀，并且能通過空氣飛沫等途徑在人群中造成大面積傳播，三者早期癥狀并不容易區分。相比之下，2019-nCoV的基本增生速率(Basicreproduction rate,R0)值為2.2，遠遠高于其他流感；同時2019-nCoV造成重型肺炎的比例更高，重癥率(20％以上)與死亡率(2％以上)也顯著高于流感。因此，在有以上癥狀的患者中，若能通過核酸檢測手段鑒別三個不同病原體，對于疾病控制，人民生命健康安全的保障具有重要意義。

目前針對以上三種病原的核酸檢測有以下方法：熒光定量PCR法、環介導恒溫擴增法、基于重組酶介導恒溫核酸擴增法和重組酶聚合酶擴增法等。但是目前主要依賴熒光定量PCR法：患者拭子標本經核酸釋放，逆轉錄后，用Taqman探針法對樣品進行熒光定量PCR檢測。該方法能在較短時間內得到準確結果。但需依托熒光定量PCR儀，單次少量檢測成本高。

其他常用的核酸擴增方法包括：環介導恒溫擴增法(loop-mediated isothermalamplification,LAMP)，基于重組酶介導恒溫核酸擴增法(recombinant enzyme mediatedisothermal nucleic acid amplification,RAA)和重組酶聚合酶擴增法(recombinasepolymerase amplification,RPA)等核酸恒溫擴增方法，在恒定溫度也能高效擴增核酸，擺脫了熱循環儀的限制，但是容易產生假陽性信號。

發明內容

本發明于鑒于上述現有技術的不足，迫切需要一種既能不依賴于貴重的熒光定量PCR儀，同時能較特異的檢測以上三種病原體核酸的方法。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：

一方面本發明提供了一種基于CRISPR/Cas12a方式分別檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒和新型冠狀病毒的crRNA，其特征在于，所述crRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:7～9所示。

優選地，所述檢測甲型流感病毒的crRNA為序列SEQ ID NO:7。

優選地，所述檢測乙型流感病毒的crRNA為序列SEQ ID NO:8。

優選地，所述檢測新型冠狀病毒的crRNA為序列SEQ ID NO:9。

另一方面本發明提供了一種基于CRISPR/Cas12a方式分別檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒和新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于，包括本發明所述的crRNA、Cas蛋白、單鏈DNA報告序列、擴增檢測目的病毒的引物組、緩沖液、試紙條及分析緩沖液。

優選地，所述crRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:7～9所示。其中所述檢測甲型流感病毒的crRNA為序列SEQ ID NO:7。所述檢測乙型流感病毒的crRNA為序列SEQ ID NO:8。所述檢測新型冠狀病毒的crRNA為序列SEQ ID NO:9。