[發(fā)明專利]一種痰液保存液

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010330328.5
• 申請日: 2020-04-24
• 公開（公告）號: CN111218444B
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳紹宇;何瑰;黃穎;李楚明;劉慧;米小娟
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州安必平醫(yī)藥科技股份有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廣州睿金澤專利代理事務(wù)所(普通合伙) 44430
• 代理人: 宋偉文

本發(fā)明提供了一種痰液保存液，包含胍鹽、金屬螯合劑、表面活性劑等。本發(fā)明保存液不含強(qiáng)堿成分，減少對核酸尤其是RNA的破壞。本發(fā)明保存液能夠保持痰液樣本穩(wěn)定，并快速液化痰液，抑制RNA酶，獲得純度較高的RNA，提高檢測的準(zhǔn)確性。液化后的痰液樣本直接進(jìn)行RNA提取，得率純度均優(yōu)于對比方法。本發(fā)明保存液保存后的樣本可用于磁珠法、柱提法、裂解法等多種方法，未見干擾。液化后的痰液樣本可直接用于細(xì)胞學(xué)檢測，未見對細(xì)胞密度或細(xì)胞染色的影響。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種痰液保存液。

背景技術(shù)

新型冠狀病毒2019-nCoV是一種新發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒，主要傳播途徑為經(jīng)呼吸道飛沫和接觸傳播，在相對封閉的環(huán)境中長時(shí)間暴露于高濃度氣溶膠情況下存在氣溶膠傳播的可能；人群普遍易感。

港大潘烈文等【Pan Y, Zhang D, Yang P, et al. Viral load of SARS-CoV-2in clinical samples[J]. The Lancet Infectious Diseases, 2020.】在對咽拭子、痰液、尿液、糞便樣本的比較中發(fā)現(xiàn)，痰液樣本的病毒載量普遍高于咽拭子樣本。尿液或糞便樣本中均未檢測到新冠病毒RNA。武漢大學(xué)中南醫(yī)院與武漢市金銀潭醫(yī)院在medRxiv預(yù)印本平臺上發(fā)表的文章指出【Lin C, Xiang J, Yan M, et al. Comparison of throat swabsand sputum specimens for viral nucleic acid detection in 52 cases of novelcoronavirus (SARS-Cov-2) infected pneumonia (COVID-19)[J]. medRxiv, 2020.】，與咽拭子樣本相比，通過痰液樣本進(jìn)行2019-nCoV檢測更準(zhǔn)確、便捷。痰標(biāo)本和咽拭子中2019-nCoV的陽性率分別為76.9％和44.2％，大部分患者(51.9%)咽拭子和痰標(biāo)本檢測結(jié)果相同，然而相當(dāng)多的患者(40.4%)痰標(biāo)本陽性、咽拭子陰性，只有極少數(shù)患者(7.7%)痰標(biāo)本陰性、咽拭子陽性，痰液樣本顯示出明顯高于咽拭子樣本的陽性率（P=0.001）。

目前已經(jīng)明確取樣對于檢測的重要性，痰液樣本的檢測陽性率高于咽拭子。國家衛(wèi)健委發(fā)布的《新冠肺炎實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)指南》建議采集痰液或肺泡灌洗液等敏感性更高的樣本進(jìn)行復(fù)測。

痰液檢驗(yàn)包括顯微檢查、涂片檢查和病原微生物檢查，可以輔助診斷或確診某些呼吸系統(tǒng)疾病。病原體分離培養(yǎng)法是確定下呼吸道感染病原體的“金標(biāo)準(zhǔn)”，是臨床檢驗(yàn)科進(jìn)行呼吸道分泌物檢測的常規(guī)方法。分離培養(yǎng)法通過區(qū)分痰液中分離到的微生物是病原菌還是上呼吸道的正常菌群進(jìn)行臨床診斷。例如，痰液中培養(yǎng)出結(jié)核分枝桿菌、放線菌、或嗜肺軍團(tuán)菌，具有臨床意義；而分離出草綠色鏈球菌、表皮葡萄球菌、念珠菌等鼻咽腔正常菌群，則視微生物的數(shù)量進(jìn)行判別。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)為代表的分子生物學(xué)檢測方法可以定性確診病原體感染，具快速、靈敏、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。該方法需要對痰液提取核酸后進(jìn)行檢測。但痰液中有大量黏液，其內(nèi)細(xì)胞成分不易分離，對核酸提取存在很大困難。常規(guī)提取時(shí)為去除黏液進(jìn)行了多次抽提，導(dǎo)致過程中細(xì)胞減少或核酸丟失，其次混入蛋白質(zhì)使核酸純度下降。因此，痰液核酸提取前的液化非常關(guān)鍵，能夠降低黏液影響。

現(xiàn)有痰液標(biāo)本使用普通的干燥塑料瓶采集，隨后在一小時(shí)內(nèi)完成送檢制片。但實(shí)際操作中常會出現(xiàn)痰標(biāo)本中細(xì)胞變性自溶情況；此外，細(xì)胞中黏液的存在使細(xì)胞發(fā)生重疊，雜亂排布，影響閱片。針對此，出現(xiàn)了針對痰液前處理的保存液和消化液產(chǎn)品。例如，主要成分為次氯酸鈉和表面活性劑的溶痰劑；主要成分為乙酰基一半胱氨酸，枸緣酸鈉和磷酸鹽緩沖液的痰消化液；主要成分為氨性水溶液液化劑和蘇糖醇溶液的液化劑；主要成分二硫蘇糖醇、氯化鈉、氯化鉀、磷酸鹽等的痰樣本稀釋液（痰消化液）。作為優(yōu)化方案CN106967778B公開了一種快速痰液溶解保存液，包括乙醇、甘油、植物油、分支酸、EDTA二鈉、SDS、硫代糖等組分，將溶解速度從2分鐘減少到30秒。