[發明專利]一種基于量子點-核酸適配體-氧化石墨烯建立的對β-乳球蛋白檢測的熒光方法

在審

• 申請號: 202010327075.6
• 申請日: 2020-04-23
• 公開（公告）號: CN111426667A
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: 陸旸;張詠;王芮;王碩
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/68;G01N33/533
• 代理公司: 天津合正知識產權代理有限公司 12229
• 代理人: 張艷梅

本發明涉及一種基于量子點?核酸適配體?氧化石墨烯建立的對β?乳球蛋白檢測的熒光方法。通過利用羧基修飾的水溶性量子點作為熒光團，氨基修飾的適配體(aptamer)作為識別分子，氧化石墨烯(GO)作為猝滅劑，構建了一種新型的復合納米熒光探針，將反應物在紫外燈下拍攝成像并使用image J圖像處理軟件獲得定量的檢測數據，實現了對目標分子β?乳球蛋白的高靈敏檢測。

技術領域

本發明屬于生物納米技術傳感領域，具體涉及一種基于量子點-核酸適配體-氧化石墨烯建立的對β-乳球蛋白檢測的熒光方法。

背景技術

β-乳球蛋白(β-Lg)是由乳腺上皮細胞合成的乳特有蛋白，是反芻動物和豬等乳中的主要乳清蛋白成分。近年來研究表明：在人乳中也含有β-乳球蛋白，但是含量極少，且胃酸和胃蛋白酶不能將其消化水解，因此可通過胃腸道進入血液循環。β-乳球蛋白在牛乳乳清中占蛋白質總量的43.6％-50.0％，是乳清中含量最多的蛋白，在脫脂牛乳中的含量約為2.0-4.0g/L。牛乳中的β-乳球蛋白分子量在18400Da左右，等電點為5.1-5.3，一共由162個氨基殘基組成，有兩個遺傳變異體。牛乳蛋白含有人體必需的氨基酸、豐富的鈣磷，是人類重要的蛋白質來源。尤其對于嬰幼兒來說，牛乳是除了母乳之外的重要營養物質，但是牛乳又是較易引起過敏的食物之一。牛乳過敏是由乳制品中的蛋白過敏原所引發的一種變態反應，它是由lgE介導或非lgE介導的免疫反應，在兒童中的發病率為0.1％-7.5％，且嚴重危害嬰幼兒健康，主要見于較小的嬰幼兒，一般是暫時性的，隨著年齡的增長，會自動消失。絕大多數的牛乳蛋白都具有潛在的致敏性，但目前普遍認為酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白是主要的過敏原。有資料顯示：約82％的牛乳過敏病人都對β-乳球蛋白產生過敏反應。

目前，國內外對食品中β-乳球蛋白的檢測方法包括：以檢測蛋白為基礎的免疫化學檢測方法，如放射性過敏原吸附抑制法、酶標記過敏原吸附抑制法、火箭免疫電泳法、免疫印跡法、酶聯免疫吸附法(ELISA)；以檢測DNA為基礎的測試方法，如聚合酶鏈反應、組胺釋放法以及生物傳感器、質譜技術、多肽微陣列、生物芯片等新技術。隨著ELISA法檢測方法的成熟，目前市場上出現多種商業化試劑盒。雖然市場上也有檢測牛奶過敏原的PCR試劑盒，但在實際樣品檢測中，由于雞肉、牛肉容易造成假陽性反應，目前一般很少選取PCR方法檢測牛奶過敏原。在實際檢測工作中仍以酶聯免疫法(ELISA)技術為主。ELISA技術測定的特異性強，但低靈敏度和精密度限制了其應用，且在檢測β-乳球蛋白的同時也會檢測到蛋白代謝物，因為它們具有相同的抗體表位，這會導致測得濃度常常被高估。因此，更高靈敏度、高選擇性及低成本的β-乳球蛋白檢測方法亟需開發。