[發明專利]一種基于金納米粒子手性三維結構構象轉換的制備方法

有效

• 申請號: 202010325740.8
• 申請日: 2020-04-23
• 公開（公告）號: CN111515410B
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發明（設計）人: 胥傳來;瞿愛華;匡華;徐麗廣;孫茂忠;劉麗強;吳曉玲;宋珊珊;胡擁明;郝昌龍
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: B22F9/24
• 分類號: B22F9/24;B22F1/054;B82Y30/00;B82Y40/00;C12Q1/6839
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;張仕婷

1.一種基于金納米粒子手性三維結構構象轉換的制備方法，其特征在于步驟如下：

（1）5nm金納米粒子的合成：采用兩步法合成5nm的金納米顆粒；

（2）20nm金納米粒子的合成：采用檸檬酸鈉還原法合成20nm的金納米顆粒；

（3）30nm金納米粒子的合成：采用種子生長法合成30nm的金納米顆粒；

（4）手性三維結構的制備及構象轉換：利用DNA自組裝技術合成手性三維結構；引入特異性識別的序列誘導構象變化；具體為：

a、按質量濃度計；首先30nm金納米粒子和D型的半胱氨酸 D-Cys以摩爾比為1:1000混合，反應6h后在5000×g下離心10 min，得到D-Cys修飾的金納米粒子C_30(D)；20nm金納米粒子和L型的半胱氨酸 L-Cys以摩爾比為1:1000混合，反應6h后在7000×g下離心10 min，得到L-Cys修飾的金納米粒子C_20(L)；

b、在上述制備的D-Cys修飾的金納米粒子 C_30(D)中加入DNA1和DNA7，C_30(D)：DNA1：DNA7的摩爾比為1:100:30；再加500μL、濃度為100mM，pH3.0的含質量濃度為0.01％的Tween 20的檸檬酸鈉溶液，提高DNA的偶聯率；反應12h后，在5000×g下離心10min去除未結合的DNA并重懸在PBS緩沖液中；再以1:20的摩爾濃度比加入DNA5，將混合物在60℃水浴中溫育10min，然后冷卻至37℃保持2h；DNA功能化的金納米顆粒在5000×g下離心10 min，然后重懸于PBS中；在L-Cys修飾的金納米粒子 C_20(L)中加入DNA2和DNA8，以C_20(L)：DNA2：DNA8的摩爾比為1:12:4的比例混合；反應12h后，在7000×g下離心10min去除未結合的DNA；再以摩爾比1:20加入DNA6，得到DNA6功能化的金納米顆粒；在5nm的金納米粒子 S₅中加入DNA3和DNA4，以S₅：DNA3：DNA4的摩爾比為1：4：4的比例混合，反應12 h后，在13000×g下離心10min去除未結合的DNA；上述DNA修飾的金納米粒子重懸在PBS緩沖液中；將DNA功能化的C_30(D)、C_20(L)和S₅以摩爾比為1:1:100的比例混合，混合物在37℃下孵育12h，然后在3000×g下離心10min得到C_30(D)S₅-C_20(L)三維結構；

構象轉換：在1 mL、濃度為50nM的C_30(D)S₅-C_20(L)溶液中加入終濃度為0.5μM的Fox3 mRNA序列，S₅從C_30(D)轉移到C_20(L)形成C_30(D) -C_20(L)S₅結構；

（5）透射電鏡和圓二色光譜表征：對合成的手性三維結構及其構象轉換過程進行電鏡和圓二色譜表征；

所述DNA1序列如SEQ ID NO.1所示，

DNA2序列如SEQ ID NO.2所示，

DNA3序列如SEQ ID NO.3所示，

DNA4序列如SEQ ID NO.4所示，

DNA5序列如SEQ ID NO.5所示，

DNA6序列如SEQ ID NO.6所示，

DNA7序列如SEQ ID NO.7所示，

DNA8序列如SEQ ID NO.8所示，

Fox3 mRNA序列如SEQ ID NO.9所示。