[發(fā)明專利]制備檢測(cè)hFABP/GPBB雙指標(biāo)免疫層析試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010325195.2
• 申請(qǐng)日: 2020-04-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113533715A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊琦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢市朗典精醫(yī)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/533
• 分類號(hào): G01N33/533;G01N33/543;G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明具體涉及建立一種同時(shí)檢測(cè)心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(Heart?type fatty acid binding protein，hFABP)和糖原磷酸化酶同功酶BB(Glycogen phosphorylase?BB，GPBB)免疫層析試劑盒，主要成分為免疫層析試紙條，由PVC底板上依次Fusion5、硝酸纖維素膜和吸水紙組成。其中Fusion5吸附有hFABP抗體?微球和GPBB抗體?微球，硝酸纖維素膜固定hFABP抗體形成檢測(cè)線1(T1線)，固定GPBB抗體形成檢測(cè)線2(T2線)，固定抗IgG抗體形成質(zhì)控線(C線)。本發(fā)明同時(shí)公開(kāi)了hFABP抗體和GPBB抗體偶聯(lián)微球過(guò)程。本發(fā)明建立hFABP/GPBB免疫層析試劑盒，同時(shí)檢測(cè)血液或其他體液中hFABP和GPBB濃度，用于早期診斷缺血性腦中風(fēng)并監(jiān)測(cè)缺血性腦中風(fēng)的預(yù)后。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫學(xué)領(lǐng)域，具體涉及制備出hFABP抗體-熒光微球和GPBB抗體-熒光微球，建立hFABP/GPBB 免疫層析試劑盒過(guò)程。

背景技術(shù)

缺血性腦中風(fēng)(Ischemic Stroke)是過(guò)去幾十年全球主要死亡原因之一，其死亡率正在逐步提高。除了傳統(tǒng)的心腦血管危險(xiǎn)因素，如吸煙，2型糖尿病，高血壓和血脂異常，研究人員一直尋找潛在生物標(biāo)志物用于預(yù)測(cè)缺血性腦中風(fēng)發(fā)生及預(yù)后，沒(méi)有單一血液標(biāo)記物能預(yù)測(cè)缺血性腦中風(fēng)發(fā)生，但結(jié)合多個(gè)血液標(biāo)記物可以增強(qiáng)預(yù)測(cè)缺血性腦中風(fēng)發(fā)生的能力，結(jié)合血液中糖原磷酸化酶同功酶BB(Glycogen phosphorylase-BB，GPBB)和心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(Heart-type fatty acid binding protein，hFABP) 雙指標(biāo)用于早期預(yù)測(cè)缺血性腦中風(fēng)發(fā)生具有重要的臨床價(jià)值。

糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase，GP)是糖原代謝的關(guān)鍵酶。人體中有其3種同工酶，分別為肝型糖原磷酸化酶同功酶LL(GPLL)、肌型糖原磷酸化酶同功酶MM(GPMM)和腦型糖原磷酸化酶同功酶BB (GPBB)。GPBB是心肌或腦組織分解糖原為葡萄糖-1-磷酸關(guān)鍵酶，在缺氧或低血糖條件下，提供足夠的葡萄糖轉(zhuǎn)化為能量。心肌受損早期，導(dǎo)致心肌缺氧并釋放心肌細(xì)胞中GPBB到血循環(huán)中，血液中GPBB水平升高是判斷早期急性心肌缺血敏感和特異性指標(biāo)。人大腦GPBB濃度比心臟高100倍，在腦缺血后，腦細(xì)胞中GPBB釋放到血循環(huán)中，血液中GPBB水平升高。有研究檢測(cè)缺血性腦中風(fēng)發(fā)病12小時(shí)內(nèi)血液中GPBB 水平為46.3ng/ml，24-48小時(shí)為38.6ng/ml，而正常對(duì)照組血液中GPBB水平為4.1ng/ml，GPBB曲線下面積(AUC)為0.96、敏感性為93％、特異性為93％，血液中GPBB水平可用作早期診斷缺血性腦中風(fēng)發(fā)生的標(biāo)記物。

hFABP是一種分子量12-15kDa細(xì)胞質(zhì)蛋白，廣泛存在于活性脂肪酸代謝活躍組織中，如神經(jīng)元細(xì)胞體和心肌細(xì)胞中，hFABP參與長(zhǎng)鏈脂肪酸的細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸。hFABP由132種氨基酸組成，是心肌組織中最豐富的蛋白質(zhì)之一，占人類心臟細(xì)胞質(zhì)蛋白的5-15％。當(dāng)神經(jīng)元或心肌受損時(shí)，能迅速地釋放到血循環(huán)中，在缺血性腦中風(fēng)的急性階段，血漿中hFABP水平急速升高。研究發(fā)現(xiàn)，缺血性腦中風(fēng)組血漿hFABP水平明顯高于對(duì)照組。在多重邏輯回歸分析中，在調(diào)整血管危險(xiǎn)因素后，hFABP指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)顯著性仍然顯著。在受試者工作特征曲線(ROC)分析中，hFABP的曲線下面積(AUC)為0.71、敏感性為59.5％、特異性為79.5％，血液中hFABP水平可作為診斷缺血性腦中風(fēng)的生物標(biāo)記物。有研究檢測(cè)腦中風(fēng)預(yù)后較好組和預(yù)后不良組患者血液中hFABP水平，分別為8.4ng/ml和16.3ng/ml，兩組間有顯著差異，p＜0.001，表明血液中hFABP 水平可用作判定缺血性腦中風(fēng)預(yù)后的指標(biāo)。

腦組織中富含hFABP和GPBB，在腦缺血情況下，腦細(xì)胞中hFABP和GPBB釋放入血流，血循環(huán)中hFABP和 GPBB水平增高，同時(shí)檢測(cè)hFABP和GPBB雙指標(biāo)，可提高檢測(cè)出缺血性腦中風(fēng)陽(yáng)性率及特異性，需要開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)單，快速，定量檢測(cè)血液中hFABP和GPBB水平的試劑盒。