[發(fā)明專利]一種獲得耐高溫功能菌的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010324873.3
• 申請日: 2020-04-23
• 公開（公告）號: CN111500613A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭立榮;王建剛;張波
• 申請（專利權(quán)）人: 上海國璨環(huán)境科技有限公司
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/75;C40B50/06
• 代理公司: 杭州橙知果專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 33261
• 代理人: 余成鵬

1.一種獲得耐高溫功能菌的方法，其特征在于，包括獲得經(jīng)改造的轉(zhuǎn)基因細菌。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述經(jīng)改造的轉(zhuǎn)基因細菌包括：

(a)具有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列；

(b)在(a)中的核苷酸序列經(jīng)過取代和/或缺失和/或添加一個或多個核苷酸且編碼與(a)相同的氨基酸序列的核苷酸序列。

3.一種表達盒，其特征在于，所述表達盒包括在有效連接的調(diào)控序列調(diào)控下的權(quán)利要求2所述核苷酸序列。

4.一種重組載體，其特征在于，所述重組載體包括權(quán)利要求2所述核苷酸序列或權(quán)利要求3所述表達盒。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述方法包括構(gòu)建堆肥樣品嗜熱基因文庫，優(yōu)選地，應(yīng)用大腸桿菌表達系統(tǒng)構(gòu)建堆肥樣品耐高溫基因文庫。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述方法，其特征在于，分別在不同環(huán)境溫度下培養(yǎng)插入外源基因的大腸桿菌，用常見通用引物和古菌特異性引物測序鑒定插入片段長度及具體序列，將所得到的序列去除載體后，獲得耐高溫相關(guān)基因，之后隨機插入芽孢桿菌對芽孢桿菌進行基因改造。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述方法，其特征在于，將重組克隆載體分別用熱激方法轉(zhuǎn)化枯草芽孢桿菌感受態(tài)細胞，挑取白色菌落，培養(yǎng)后提取質(zhì)粒，經(jīng)酶切鑒定后，對陽性克隆進行測序驗證，結(jié)果表明重組克隆載體中分別對應(yīng)的插入權(quán)利要求2所述核苷酸序列。